А.М. Орлов¹, М.В. Козлова¹, О.А. Серикова²
¹ГУЗ Свердловской области «Станция переливания крови № 2 «САНГВИС», г. Екатеринбург
²ЗАО «Дельрус», г. Екатеринбург
Трансфузиология №3, 2013
Станция переливания крови № 2 «САНГВИС» обеспечивает ТК больницы города Екатеринбурга, а также городское гематологическое отделение (40 коек). Последние годы происходит заметный рост потребления тромбоцитов [1]. В 2009 году нами выдано 1047, в 2010 году – 1308, в 2011 – 1543, а в 2012 году 1714 терапевтических доз1. За последние 4 года отделением заготовки крови применялись различные способы получения КТ:
1. Методом автоматического афереза на аппарате «MCS+».
2. Из обогащенной тромбоцитами плазмы (ОТП).
3. Из ЛТС.
Способ получения тромбоцитов методом автоматического афереза обеспечивает высокое качество ТК, минимальное содержание лейкоцитов и эритроцитов. Допустимый срок хранения продукта составляет пять суток. Есть возможность последующей инактивации патогенов с использованием аппарата INTERCEPT, Cerus. Автоматический аферез позволяет подбирать доноров по определенному фенотипу, восполнять дефицит по определенной группе крови, автоматизировать и стандартизировать процесс [4]. Данный метод получения тромбоцитов наиболее предпочтителен, однако является самым дорогостоящим. С целью оптимизации затрат на получение ТК, наша СПК наряду с автоматическим аферезом применяет методы получения тромбоцитов из дозы консервированной крови. Способ выделения тромбоцитов из ОТП прост в исполнении и не требует дорогостоящих расходных материалов, однако получаемый ТК содержит значительную примесь лейкоцитов и эритроцитов (более 4х106). На третьи сутки хранения при +22°С наблюдается снижение рН среды до 6,5. Высокая примесь эритроцитов исключает возможность инактивации данного ТК на аппарате INTERCEPT, Cerus. Образование микросгустков затрудняет последующую фильтрацию для удаления лейкоцитов. Ввиду вышеперечисленных недостатков мы были вынуждены приступить к поиску альтернативных способов получения тромбоцитов. После обучения в ОПК (заведующая отделением С.А. Трофимова) на базе городской больницы № 31 (г. Санкт-Петербург), мы начали применять методику получения пулированного ТК из ЛТС.
Способ выделения тромбоцитов из ЛТС сложнее в исполнении, чем получение тромбоцитов из ОТП, однако позволяет оперативно выделить терапевтическую дозу ТК с низким содержанием лейкоцитов и эритроцитов, а также возможностью его дальнейшей инактивации [6]. С 2010 г. мы полностью отказались от метода получения ТК из ОТП, заменив его ТК, выделенным из ЛТС (рис. 1).
Материалы и методы На первом этапе внедрения метода мы применяли контейнеры полимерные счетверенные с двумя растворами консервантов СPD-SAGM, конфигурации «top and top» (с двумя портами в верхней части контейнера). Центрифугирование дозы цельной крови осуществлялось в течение 12 минут при ускорении 4500 g. Разделение крови на эритроцитную взвесь, плазму и ЛТС (40–50 мл) осуществлялось механическими плазмоэкстракторами при визуальном контроле.
После получения результатов лабораторного обследования 5–6 одноимённых по группе крови и резус-фактору, ЛТС и плазма одного из доноров объединялись в пул. Для пулирования ЛТС применялась специализированная система полимерных контейнеров с интегрированным фильтром для удаления лейкоцитов «Teruflex BP-Kit» либо «Autostop», а также устройство для стерильного соединения пластиковых трубок «TSCDII». Центрифугирование пула ЛТС для выделения концентрата тромбоцитов производилось при ускорении 480 g в течение 6 минут. Полученный ТК экстрагировался через встроенный в систему фильтр в газопроницаемый контейнер, обеспечивающий хранение тромбоцитов в течение 5 суток. Содержание тромбоцитов в ТК составляло от 210 х 109 до 350 х 109. Подсчет тромбоцитов, эритроцитов и лейкоцитов осуществлялся на анализаторе «МЕК-6400К».
Следующим этапом была заготовка крови в контейнеры полимерные с двумя растворами консервантов СPD-SAGM конфигурации «top and bottom» (с верхним и нижним выходами). Данная конфигурация контейнеров позволяет избежать потерь тромбоцитов в трубках и складках контейнеров, т.к. весь ЛТС остаётся в первичном контейнере. Разделение крови на эритроцитную взвесь, плазму и ЛТС осуществлялось на автоматических фракционаторах компонентов крови «T-ACE II». Содержание тромбоцитов в ТК, полученном из 5-6 ЛТС по этой методике, составил от 220 х 109 до 370 х 109. В 2012 году нами была приобретена специализированная центрифуга «TACSI». Центрифуга позволяет полностью автоматизировать этапы выделения ТК из пула ЛТС. Процессы сепарации, экстракции и фильтрации производятся непосредственно во время центрифугирования под контролем оптических датчиков и микропроцессора. Один цикл центрифугирования позволяет получить до 6 терапевтических доз ТК за 15 минут [7]. Использование технологии «TACSI» позволило получать терапевтическую дозу ТК из 4 ЛТС вместо 5–6. Содержание тромбоцитов в дозах составило от 270 х 109 до 530 х 109 (табл. 1).
Заключение
Выделение тромбоцитов из ЛТС является наиболее приемлемой альтернативой автоматическому тромбоцитаферезу. ТК, полученный из ЛТС, по своим качествам не уступает КТ, заготовленному аппаратным способом, и удовлетворяет требованиям для последующей инактивации на аппарате CERUS:
Содержание тромбоцитов от 250 до 350 х 109.
Остаточные лейкоциты в дозе менее 0,2 х 106.
Остаточные эритроциты менее 1 х 106.
Срок годности 5 суток.
Методика позволяет максимально реализовать донорский потенциал. Из каждой дозы крови мы получаем три компонента: эритроцитная взвесь с удалённым ЛТС, доза плазмы, обедненной лейкоцитами, и доза ЛТС, которая в дальнейшем может использоваться для получения тромбоцитов. Поддерживая запас ЛТС, СПК имеет возможность оперативно приготовить ТК по экстренной заявке лечебного учреждения. Применение контейнеров конфигурации «top and bottom», автоматических фракционаторов и центрифуги «TACSI» позволяет увеличить выход тромбоцитов из пулированных ЛТС в среднем на 30% .