И.Я. Голоусиков¹, В.В. Данилец¹, О.Г. Панасенкова¹, Т.А. Правова1, Н.Г. Дашкова²
¹ ГБУЗ «Городская больница № 3 ДЗМ», г. Москва
² ГБОУ ВПО «Первый Московский государственный медицинский университет имени И.М. Сеченова» Минздрава России, г. Москва
Трансфузиология №2, 2015
Резюме
Иммуногематологические исследования образцов крови доноров и реципиентов в условиях многопрофильного стационара целесообразно проводить с использованием высокочувствительных и высокоспецифичных иммуногематологических методов, что обеспечит высокий уровень иммуногематологической безопасности гемокомпонентной терапии и позволит минимизировать риск посттрансфузионных реакций. Представлены данные сравнительного тестирования 20 326 образцов крови доноров и реципиентов различными методами иммуногематологического обследования: гемагглютинация на микропланшетах, твердофазная технология и гелевая технология с использованием карт различных производителей. При использовании твердофазной технологии «Capture-R» чаще выявлялся антиген А2 в группе наблюдения АВ(IV), а также Dw в группе наблюдения Rh – как у доноров, так и у реципиентов.
Ключевые слова: группы крови системы АВ0, резус-фенотип, донор, реципиент.
Введение
Проблеме оптимизации и улучшения качества иммуногематологического тестирования больных перед трансфузией донорских гемокомпонентов в отечественном здравоохранении уделяется повышенное внимание. Принятый в апреле 2013 года приказ Минздрава России № 183н «Об утверждении Правил клинического использования донорской крови и (или) ее компонен- тов» [1] внес существенные дополнения в алгоритм предтрансфузионного тестирования, регламентируя подбор идентичных эритроцитов донора и реципиента по 10 антигенам. В обязательном порядке регламентируется также скрининг аллоиммунных антител у реципиентов с использованием панели стандартных эритроцитов. Новые правила, расширяя спектр и увеличивая количество исследований, диктуют необходимость сравнения различных технологий и выбора наиболее чувствительных, информативных, экономически доступных методов иммуногематологического тестирования. В част- ности, представляет интерес сравнение использования твердофазной и ге- левой технологий. Единичные исследования, посвященные сопоставлениям различных технологий тестирования, проводились в США [2]. Сведения о подобного рода исследованиях в отечественной литературе отсутствуют.
Цель настоящей работы – оценить диагностическую значимость технологии гемагглютинации в микропланшетах и твердофазной технологии «Сapture» компании Immucor (США) и сравнить с двумя гелевыми технологиями – Bio-Rad (США) и Grifols (Испания).
Материалы и методы
За период с января по декабрь 2013 года на анализаторе «Galileo Neo» Immucor (CША) были проведены иммуногематологические исследования 20 326 образцов крови. Параллельно гелевыми методами Bio-Rad (США) и Grifols (Испания) протестировано 7073 образца крови доноров реципиентов, беременных женщин и рожениц. Исследования проводили в 2 этапа. Первый этап включал определение групп крови по системе АВ0 с идентификацией подгрупп (А2, В2), резус-принадлежности, выявление слабого варианта анти- гена D – DW и экстраагглютининов анти-А1. Второй этап заключался в проведении скрининга антиэритроцитарных аллоантител различными методами и установлении их специфичности. При работе методами Immucor (США) использовался полностью автоматический анализатор «Galileo Neo», моно- клональные сыворотки двух разных марок – «ImmuClon» и «NOVACLON» для определения антигенов системы АВ0, Rh, Kell, микропланшеты «Сapture-R» для выявления антиэритроцитарных антител, определения титра, стандартные эритроциты «Referenscells A (1), B» и другие материалы, предусмотренные технологией, в том числе контрольные.
Результаты
Результаты параллельного тестирования образцов крови по системе АВ0 и резус с использованием твердофазной и гелевой технологий приведены в табл. 1.
Как показали исследования, частота выявления антигена А2 и антигена В2 в группах наблюдений А (II) и В (III) при использовании всех трех методов существенно не различалась. Выявление антигена А2 в группе наблюдения АВ (IV) при использовании твердофазного метода было чаще, чем с использованием гелевой технологии (х² = 4,46, p < 0,05). В группе наблюдения Rh –антиген DW при использовании гелевой технологии выявлялся в 0,9–1,6%, а с использованием анализатора «Galileo Neo» Immucor – в 2,2% (х² = 5,8, х² = 6,1, p < 0,05).
Выявление и подтверждение слабого варианта антигена D особенно важно при исследовании образцов крови доноров. Следует напомнить, что при определении резус-принадлежности у доноров и выявлении слабых вариантов антигена D донорские эритроциты относят к резус-положительным, что позволяет избежать сенсибилизации при переливании таких эритроцитсодержащих сред резус-отрицательным реципиентам [3, 4, 5, 6, 7]. Обращает на себя внимание тот факт, что при использовании твердофазной технологии в образцах крови с подгруппой A2B (IV) в 7 случаях, в том числе у 3 доноров, выявлены экстраагглютинины анти-А1, тогда как с помощью технологии Bio-Rad экстраагглютинины обнаружены только в одном образце, а с использованием Grifols не выявлены ни в одном образце.
Результаты скрининга антител при параллельном тестировании образцов крови тремя методами приведены в табл. 2.
Как следует из табл. 2, антиэритроцитарные аллоантитела были выявлены у 0,6–0,9% обследованных лиц. Фенотипирование антигенов эритроцитов и выявление аллоиммунных антиэритроцитарных антител – необходимые составляющие для обеспечения иммуногематологической совместимости крови донора и реципиента при гемотрансфузиях [1, 3, 4, 6–8]. Ошибки при проведении исследований антигенов эритроцитов и антиэритроцитарных антител могут быть результатом как нарушения технологии, так и применения неадекватных схем диагностики [4, 6, 9].
Неправильное заключение о наличии или отсутствии антигенов и аллоиммунных антител у доноров и реципиентов повышает риск развития пост-трансфузионных осложнений гемолитического типа [5, 9]. Выбор высокочувствительных и высокоспецифичных иммуногематологических методов позволит обеспечить высокий уровень иммуногематологической безопасности гемокомпонентной терапии и минимизировать риск посттрансфузионных реакций [7, 10].
Заключение
Современные автоматизированные варианты классических методов иммуногематологического тестирования (гемагглютинация на микропланшетах, твердофазная технология) и гелевые технологии эффективно используются при исследовании крови доноров и различных категорий реципиентов. Полученные результаты показали преимущество технологии Immucor при выявлении экстраагглютининов анти-А1 у доноров и реципиентов подгрупп А2В (IV), а также антигена DW по сравнению с гелевыми технологиями.
Литература
1. Приказ Министерства здравоохранения Российской Федерации от 02.04.2013 г. № 183н «Об утверждении правил клинического использования донорской крови и (или) ее компонентов». – М., 2013. – 26 с.
2. Issitt P.D., Anstee D.J. Applied Blood Group Serology. – 4-th ed. – Durham, NC, USA: Montgomery Sc. Publ., 1998. – 1208 p.
3. Иммуносерология (нормативные документы) / Составит. А.Г. Башлай, С.И. Донсков. – М.:ВНИИТИ, 1998. – 196 с.
4. Донсков С.И., Мороков В.А. Группы крови человека: Руководство по иммуносерологии. – М.: ИП Скороходов В.А., 2011. – 1016 с.
5. Косяков П.Н. Изоантигены и изоантитела человека в норме и патологии. – М.: Медицина, 1974. – 360 с.
6. Рагимов А.А., Дашкова Н.Г. Основы трансфузионной иммунологии. – М.: Медицинское информационное агентство, 2004. – С. 279–283.
7. Скудицкий А.Е. Профилактика посттрансфузионных осложнений, обусловленных групповыми антигенами эритроцитов: автореф. дис. … канд. мед. наук. – М., 2001. – 26 с.
8. Weisbach V., Kohnhauser T., Zimmerman R. et al. Comparison of the performance of microtube column systems and solid-phase systems and the tube low-ionic-strength solution additive indirect antiglobulin test in the detection of red cell alloantibodies // Transfus. med. – 2006. – Vol. 16, № 4. – P. 276–284.
9. Минеева Н.В. Антитела к антигенам эритроцитов и методы их выявления: Методические рекомендации. – СПб., 2000. – 14 с.
10. Умнова М.А. Изосерологические системы крови человека и их значение в трансфузиологии // Групповые системы крови и гемотрансфузионные осложнения / Под ред. проф. М.А. Умновой. – М.: Медицина, 1989. – С. 5–30.