Генетика опухолей кроветворной системы – от диагностики к терапии

ФЕДЕРАЛЬНОЕ МЕДИКО-БИОЛОГИЧЕСКОЕ АГЕНТСТВО ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ

«РОССИЙСКИЙ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ГЕМАТОЛОГИИ И ТРАНСФУЗИОЛОГИИ ФЕДЕРАЛЬНОГО МЕДИКО-БИОЛОГИЧЕСКОГО АГЕНТСТВА»

ГЕНЕТИКА ОПУХОЛЕЙ КРОВЕТВОРНОЙ СИСТЕМЫ – ОТ ДИАГНОСТИКИ К ТЕРАПИИ

VIII Всероссийская научно-практическая конференция с международным участием

 30-31 МАЯ 2025 ГОДА САНКТ-ПЕТЕРБУРГ 
 

Генетика опухолей кроветворной системы – от диагностики к терапии / Материалы VIII Всероссийской научно-практической конференции с международным участием. – Спб., 2025. – 100 с.

 Материалы конференции размещены в алфавитном порядке по фамилии первого автора.

Ш.З. Аброров, Ф.Ж. Холиков, М.С. Исламов, И.В. Бергер, А.А. Бобоев, Э.Ж. Исхаков, А.Ж. Махмудова, А.А. Каюмов, Ш.Г. Заиров, М.С. Нигматова, Н.Р. Латипова, З.Дж. Юнусова, Ж.С. Худайбердиев, Ф.Р.Т оштемиров, Д.О. Оразханов, Б.Б. Баходиров, К.А. Олимжонов, М.М. Ахмадхужаев, С.Б. Мухаммадиев, С.С. Асилов, А.А. Омонов, Ш.Р. Шавкатов, А.А. Мелибоев

ВНЕДРЕНИЕ ПРАКТИКИ ОПРЕДЕЛЕНИЯ МИНИМАЛЬНОЙ  (ИЗМЕРИМОЙ) ОСТАТОЧНОЙ БОЛЕЗНИ МЕТОДОМ МНОГОЦВЕТНОЙ ПРОТОЧНОЙ ЦИТОФЛУОРОМЕТРИИ, КАК ПРЕДИКТОР РЕЦИДИВОВ ПРИ ОСТРЫХ ЛИМФОБЛАСТНЫХ ЛЕЙКОЗАХ В УЗБЕКИСТАНЕ

Республиканский специализированный научно-практический медицинский центр гематологии, Ташкент

 Введение. Острый лимфобластный лейкоз (ОЛЛ) — одно из самых рас- пространенных онкогематологических заболеваний. Несмотря на дости- жения в области диагностики и лечения, основной проблемой остаются рецидивы заболевания. Одним из наиболее значимых факторов, предсказы- вающих вероятность рецидива, является наличие минимальной (измери- мой) остаточной болезни (МОБ) — остаточных опухолевых клеток, которые могут быть не выявлены стандартными методами диагностики, но сохра- няются в организме пациента и становятся причиной повторного роста опухолевых клеток. Внедрение определения МОБ в клиническую практику Узбекистана позволит значительно улучшить прогноз для пациентов с ОЛЛ, повысив точность предсказания рецидивов и адаптируя терапевтические стратегии для каждого пациента.

Цель. Оценить результаты мониторинга МОБ у больных с В-ОЛЛ мето- дом проточной цитометрии для дальнейшего введения в практику данного исследования с целью прогнозирования ранних и поздних рецидивов и сме- ны тактики терапии.

Материалы и методы. В анализ включены данные по первичному им- мунофенотипу, 10 взрослых пациентов с диагнозом В-ОЛЛ и мониторингу МОБ. Оценка МОБ больных проводилась через 3 и 6 мес. после первичной диагностики, т. е. на этапах индукционной, реиндукционной, консолидаци- онной и противорецидивной (поддерживающей) терапии. Клетки МОБ вы- являлись с использованием 6-цветной проточной цитометрии. Для этого в панели МОБ включали антигены CD19, CD20, CD22, CD45, CD34, CD10, CD38. Бластные клетки определялись на основании слабой экспрессии CD45 или ее отсутствия. Каждый образец костного мозга был охарактеризован иммунологически и морфоцитохимически, оба исследования выполнялись с ис- пользованием материала из одной пробирки.

Результаты. Из обследованных 10 пациентов с ОЛЛ, среди них МОБ-не- гативности достигли 8 (80 %) больных. У МОБ-негативных больных был продолжен мониторинг МОБ в полной ремиссии (ПР) на отдаленных этапах терапии, и у 6 из них была обнаружена МОБ, то есть выявлен рецидив. У 4 (66,6 %) пациентов в дальнейшем развился морфологический рецидив. Ме- диана продолжительности сохранения ПР после МОБ-рецидива составила 2 месяца. У всех пациентов с МОБ-рецидивом до развития морфологического рецидива проводилась терапия: у 3 больных продолжили поддерживаю- щую терапию в соответствии с протоколом, у 3 больных сменили терапию и включили бортезомиб, митоксантрон. При сравнении этих терапевтических подходов не было получено достоверных отличий по общей выживаемости, так как выборка пациентов была небольшая, однако выявлена тенденция развития ранних рецидивов при МОБ+ и сохранения длительных ремиссий при МОБ– статусе у пациентов с ОЛЛ.

Выводы. Внедрение метода определения МОБ в клиническую практику Узбекистана является важным шагом на пути к улучшению лечения острого лимфобластного лейкоза. Своевременное определение МОБ как предсказате- ля рецидивов позволяет повысить эффективность лечения, снизить процент рецидивов и, в конечном итоге, улучшить качество жизни и выживаемость пациентов. Однако для успешной реализации этого подхода в Узбекистане необходимо обеспечить развитие технологий, обучение медицинского пер- сонала и совершенствование системы здравоохранения, что сделает лечение более доступным и эффективным для всех категорий больных.

Ю.Ю. Ассесорова, Л.К. Мустафина, К.Т. Бобоев

ПОЛИПЛОИДНОСТЬ КЛЕТОК КОСТНОГО МОЗГА У БОЛЬНЫХ ОПУХОЛЯМИ КРОВЕТВОРНОЙ СИСТЕМЫ

Республиканский специализированный научно-практический медицинский центр гематологии, Ташкент

 Введение. Хромосомные аномалии (ХА), обнаруживаемые в патологи- ческих клетках при первичном обследовании больных с опухолями кровет- ворной системы (ОКС), тесно связаны с клиническим и морфологическим подтипом заболевания. При неудаче терапии и прогрессии болезни у боль- ного могут появиться вторичные изменения кариотипа, которые присут- ствуют в одном или в нескольких клеточных субклонах, указывая на клональную эволюцию. Это делает ХА важным критерием диагностики ОКС и независимым прогностическим показателем, учитываемом при стратифи- кации риска заболевания. Диагностическая и прогностическая значимость определена для ряда наиболее часто встречающихся аномалий кариотипа. Однако спектр неслучайных цитогенетических изменений, встречающих- ся при ОКС, гораздо шире и включает в себя множество малоизученных транслокаций, делеций, инверсий, трисомий, моносомий и других структур- ных и количественных перестроек хромосом с неизвестными клинически- ми ассоциациями и прогностическим статусом.

Целью данного исследования стала оценка частоты встречаемости и не- которых клинико-биологических особенностей полиплоидных кариотипов у больных с ОКС.

Материалы и методы. Ретроспективное исследование поводилось на основе данных анализа кариотипа клеток костного мозга 363 больных: с острым миелоидным лейкозом (ОМЛ, n=97), острым лимфобластным лей- козом (ОЛЛ, n=57), миелодиспластическим синдромом (МДС, n=90), хрони- ческим миелолейкозом (ХМЛ, n=104) и Ph-отрицательной хронической мие- лопролиферативной неоплазией (ХМПН, n=15), проходивших обследование в РСНПМЦГ МЗ РУз в 2023-2025 годах. При кариотипировании оценивалось не менее 20 метафазных пластин (МФП) на одного больного. Полиплоид- ный кариотип регистрировали при количестве хромосом в МФП ~92 (око- лотетраплоидия, ~4n) и ~184 (околооктоплоидия, ~8n). При сравнении по- казателей между группами использовали t-критерий Стьюдента; различия считались статистически значимыми при р<0,05.

Результаты. Исследование показало, что полиплоидные МФП при кари- отипировании клеток костного мозга встречались у 7,7% больных ОКС. При этом у больных МДС полиплоидные метафазы наблюдались в 13,3% случаев, у больных ОЛЛ – в 10,5%, у больных ХМЛ – в 8,6% случаев. Среди больных ОМЛ полиплоидные метафазы были обнаружены только у одного больного из 96, а при Ph(-)ХМПН аномалии плоидности не были установлены. Из 28 больных ОКС с полиплоидными МФП околотетраплоидный кариотип встре- чался в 75% и околооктоплоидный – в 25% случаев. Двухкратное увеличение плоидности соматических клеток было отмечено у всех больных МДС, у 83,3% больных ОЛЛ, и только у 44,4% больных ХМЛ, тогда как более чем у половины больных ХМЛ (55,6%) кариотип полиплоидных метафаз насчитывал от 150 до 184 хромосом. При этом во всех полиплоидных МФП больных ХМЛ опреде- лялся der(22) (Ph-хромосома) в количестве 2-х копий при ~4n и 4-х копий при ~8n. Доля МФП с полиплоидным кариотипом на каждого больного варьиро- вала в зависимости от диагноза. Так, у больных МДС и ХМЛ доля полиплоид- ных метафаз до 25% отмечена в 83,4% и 77,8% случаев соответственно.

При ОЛЛ относительное количество полиплоидных МФП до 25% наблюда- лось у 16,6% больных, тогда как доля полиплоидных МФП 25-50% – у 16,6% и выше 50% – у 66,8% больных. Несмотря на широкую вариабельность уровня тромбоцитов при различных ОКС сравнение данного показателя в группах боль- ных с нормальной плоидностью МФП и с полиплоидией не выявило статистиче- ски значимых различий. Однако при сравнении средних значений абсолютного количества лейкоцитов крови, установленного в день забора у больных биома- териала для кариотипирования, у больных ХМЛ и ОЛЛ с полиплоидными МФП был выявлен достоверно более низкий показатель – по сравнению с больными без изменения плоидности (соответственно, ХМЛ: 116,07±24,53 и 183,1±12,35, t=2.44, p<0,05; ОЛЛ: 16,27±10,49 и 56,01±13,64, t=2.31, p<0,05). У больных МДС с полиплоидией и диплоидным кариотипом МФП количество лейкоцитов соста- вило соответственно 5,93±3,63 и 4,0±0,42 (t=0.53, p>0,05).

Выводы. Выявляемые при кариотипировании полиплоидные МФП мож- но отнести к неслучайным цитогенетическим находкам, имеющим связь с нозологической формой опухоли кроветворной системы и более низким уровнем лейкоцитов. Однако вопрос о прогностической значимости при- сутствия клеток с полиплоидным кариотипом требует отдельного рассмо- трения. Поскольку способностью к полиплоидизации обладают клеточные элементы мегакариоцитопоэза, для выяснения вопроса от том, являются ли полиплоидные клетки костного мозга при различных гематологических новообразованиях цитогенетическим отклонением от нормы, необходимы дальнейшие исследования связи количества и уровня плоидности МФП с процессом созревания мегакариоцитов.

Б.И. Аюбова, С.Н. Бондаренко, А.Г. Смирнова, Н.К. Пастухов, Д.К. Жоголев, Т.Л. Гиндина, И.М. Бархатов, И.С. Моисеев, А.Д. Кулагин

ОЦЕНКА ЭФФЕКТИВНОСТИ ПРОТОКОЛОВ ТЕРАПИИ РАЗЛИЧНОЙ ИНТЕНСИВНОСТИ ДЛЯ ПАЦИЕНТОВ С РЕФРАКТЕРНЫМ/РЕЦИДИВИРУЮЩИМ ОСТРЫМ МИЕЛОИДНЫМ ЛЕЙКОЗОМ С ГЕНЕТИЧЕСКИМИ АББЕРАЦИЯМИ ИЗ ГРУППЫ НЕБЛАГОПРИЯТНОГО РИСКА

Научно-исследовательский институт детской онкологии, гематологии

и трансплантологии им. Р.М. Горбачевой ФГБОУ ВО ПСПбГМУ им. И.П. Павлова Минздрава России, Санкт-Петербург

Введение. Выбор оптимального протокола терапии для пациентов с рефрактерным/рецидивным (Р/Р) острым миелоидным лейкозом (ОМЛ) остается в фокусе современных проблем гематологии. Выполнение алло- генной трансплантации гемопоэтических стволовых клеток (алло-ТГСК) вне активного ОМЛ является независимым фактором улучшающим отда- ленный прогноз пациентов с Р/Р ОМЛ.

Цель. Оценить эффективность высокодозной химиотерапии (ВДХТ) и неинтенсивных венетоклакс-содержащих схем (Вен) в лечении пациентов с Р/Р ОМЛ и наличием генетических аббераций из неблагоприятной группы. 

Материалы и методы. По данным ретроспективного анализа 335 па- циентов с Р/Р ОМЛ в период с 2015 по 2024 гг., 80 пациентов имели гене- тические абберации, характерные для неблагоприятной группы риска (критерии ELN2022). Все пациенты получили ВДХТ по протоколу «FLAG» c антрациклинами или гемтузумабом озогамицином (группа ВДХТ) – 38 (37,5%), или неинтенсивные схемы на основе венетоклакса с гипомети- лирующими агентами (группа Вен) – 42 (52,5%). Преимущественно в ана- лиз были включены пациенты с комплексными изменениями -36 (45,0%), моносомным кариотипом – 13 (16,2%), реаранжировкой гена MECOM – 13 (16,2%). В двух терапевтических группах не наблюдалось статистически значимых различий в статусе (рефрактерный или рецидив) ОМЛ перед те- рапией (р=0,43), предшествовавших вариантах терапии (р=0,19), уровне бластов до начала терапии (р=0,94), при этом медиана возраста пациентов в группе Вен была выше – 44 (18-66) против 33 (18-56), р<0,001.

Результаты. Общий ответ (ОО) был достигнут у 46 пациентов (57,5%) (95% ДИ: 45,9-68,9): полная ремиссия – 28 (35%), полная ремиссия без вос- становления – 17 (21,2%), морфологически свободный от лейкоза статус – 1 (1,2%). Нами не было получено статистически значимых различий в дости- жении ОО в двух группах: 21 (55,3%) группа ВДХТ против 25 (64,1%) группа Вен (р=0,43). Возраст (р=0,31), пол (р=1,0), варианты молекулярно-генети- ческих аномалий (р=0,41) не продемонстрировали статистически значимо- го влияния на частоту ОО. Летальность, ассоциированная с терапией (до 30 дней), наблюдалась в 4 (5%) случаях: 3 случая в группе ВДХТ, 1 – в группе Вен. Алло-ТГСК была реализована после терапии у 27 (33,8%): родствен- ная – 5, неродственная – 15, гаплоидентичная – 7. У 6 пациентов алло-ТГСК выполнена в активном заболевании, в одном таком случае пациент с реа- ранжировкой MECOM продолжает наблюдение без рецидива более 5 лет (группа ВДХТ). Медиана времени от начала терапии до алло-ТГСК составила 104 (32-209) дней: медиана времени в группе ВДХТ – 67 дней против 169 в группе Вен, р=0,009. Медиана периода наблюдения всей когорты составил 15 мес. (95% ДИ: 9,9-20,1). Медиана двухлетней общей выживаемости (2ОВ) составила 8,6 мес. (95% ДИ: 6,8-14,4), 23,4% (95% ДИ: 12,1-37,0). Медиана двухлетней безрецидивной выживаемости (2БРВ) для пациентов с ОО была 6,6 мес. (95% ДИ: 3,8-10,5), 19,1% (95% ДИ: 7,6-34,5). Статистически значи- мое положительное влияние на бессобытийную выживаемость (БСВ) ока- зало достижение ОО 6,8 мес. против 1,0 мес. (OP 0,03; 95%ДИ: 0,01-0,09, р<0,001) и реализация алло-ТГСК – медиана БСВ 7,8 мес. против 1,1 мес. (ОР 0,42; 95% ДИ: 0,24-0,72; р=0,002). При этом статус ОМЛ (р=0,56), возраст (р=0,75), вариант терапии (р=0,48), не продемонстрировали своего значимого влияния на БСВ. Независимое положительное влияние на БСВ оказало выполнение алло-ТГСК в группе пациентов с ответом на терапию (ОР 0,46; 95% ДИ: 0,23-0,92; р=0,027).

Выводы. Пациенты с Р/Р ОМЛ имеют плохой прогноз. Выполнение ал- ло-ТГСК вне активного заболевания остается потенциально излечивающи- ми подходом для данной категории пациентов. Наше исследование не про- демонстрировало принципиальных различий в достижении ответа после ВДХТ или неинтенсивных протоколов на основе венетоклакса для пациен- тов Р/Р ОМЛ с неблагоприятными генетическими абберациями – оба подхо- да демонстрируют приемлемую эффективность и невысокую летальность на терапии, что позволяет их рассматривать как оптимальные предтранс- плантационные протоколы терапии.

Ф.Э. Бабаева1, А.В. Липатова2, Д.В. Кочетков2, С.К. Кравченко1, П.М. Чумаков2

ИССЛЕДОВАНИЕ СИГНАЛЬНЫХ ПУТЕЙ И ГЕНОВ, ПОЛУЧЕННЫХ С ПОМОЩЬЮ ТРАНСКРИПТОМНОГО СЕКВЕНИРОВАНИЯ, ЯВЛЯЕТСЯ НОВЫМ ШАГОМ В ПЕРСОНАЛИЗИРОВАННОМ ПОДХОДЕ К ИСПОЛЬЗОВАНИЮ ОНКОЛИТИЧЕСКИХ ВИРУСОВ ПРИ В-КЛЕТОЧНЫХ ЛИМФОПРОЛИФЕРАТИВНЫХ  ЗАБОЛЕВАНИЯХ. ГЕНЫ УСТОЙЧИВОСТИ

1ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр гематологии» Минздрава России, Москва

2Институт молекулярной биологии им. В.А. Энгельгардта РАН, Москва

Введение. Использование таргетной и персонализированной терапии принесло значительный успех и шаг вперед в лечении опухолей лимфатической системы, однако проблемы резистентности/рецидивов остаются чрезвычайно актуальными в гематологической практике. Одним из вариантов решения резистентных случаев является использование онколитических вирусов, их комбинации и/или в сочетании с химиотерапией/иммунотерапией.

Цель. Идентификация генов и сигнальных путей, влияющих на эффективность репликации вируса, посредством полнотранскриптомного секве- нирования в кратковременных лимфоидных культурах.

Материалы и методы. Секвенирование транскриптома проводили на платформе Illumina HiSeq. Приложения для анализа обогащения списка ге- нов – база данных DAVI с включенным в нее KEGG. Исследование выполнено на 16 первичных кратковременных лимфоидных культурах. Было получено около 2 тысяч сигнальных путей и 18 тысяч генов.

Результаты. В исследование были включены 16 пациентов, от которых были получены кратковременные лимфоидные культуры, в том числе 6 па- циентов с химиорезистентностью. Концепция химиорезистентности вклю- чала отсутствие ответа на несколько линий химиотерапии. Одним из генов, обнаруженных в клинических случаях химиорезистентности, является ген ABCC5 (белок 5, ассоциированный с множественной лекарственной устой- чивостью), ген, кодирующий белок, ассоциированный с лекарственной устойчивостью, член суперсемейства транспортеров АТФ-связывающей кассеты (ABC). В ряде литературных источников указывается, что этот бе- лок вызывает устойчивость к противоопухолевым препаратам, таким как тиогуанин, 6-меркаптопурин, тиопурин, аденин (р=0,0208). Было показано, что белок, кодируемый этим геном, вызывает резистентность к тиопурину при остром лимфобластном лейкозе.

ABCC6 (белок 6, ассоциированный с множественной лекарственной устойчивостью), второй ген, который также кодирует белок лекарственной устойчивости, участвует в активном транспорте лекарств в субклеточные органеллы. Ингибирует апоптоз, опосредованный TNF-альфа, блокируя одну или несколько каспаз (p = 0,0056).

Можно предположить, что сигнальные пути, участвующие в химиорезистентных случаях, представляют собой металлсодержащие пути. Металлотионеины играют роль в процессах дифференцировки, пролиферации и апоптоза. Предыдущие исследования у пациентов с раком молочной железы показали, что в химиорезистентных случаях наблюдалась повышенная экспрессия металлотионеинов в тканях молочной железы и низкая выживаемость.

Одна теория предполагала, что металлотионеины защищают от апоптоза и тем самым способствуют дифференцировке клеток и способствуют онкогенезу. Все вышеперечисленное создает основу для возможного использования металлотионеинов в качестве предикторов и маркеров химиорезистентности для оценки чувствительности терапии. В связи с этим требуется дальнейшее более детальное изучение этих сигнальных путей.

Заключение. Анализ дифференциально экспрессирующихся генов и сигнальных путей является одной из возможностей изучения патогенеза вирусного онколиза опухолей лимфоидного происхождения, что поможет в выявлении наиболее оптимальных путей воздействия на них. Получен- ные данные еще раз подтверждают тот факт, что в репликации вируса, вы- сокочувствительного к опухолевым субстратам различной этиологии, за- действовано множество сигнальных путей, которые по-разному влияют на их репликативную способность. Именно понимание влияния этих генов и путей играет ключевую роль в преодолении резистентности при терапии лимфоидных опухолей.

Б.Б. Баходиров, М.О. Омонов, Ж.С. Худайбердиев, М.А. Кузиев, К.Т. Бобоев

 ОЦЕНКА ЗНАЧИМОСТИ НОВЫХ СПОСОБОВ ДЕТЕКЦИИ BCR::ABL (Р190) И PML::RARα T(15;17) МЕТОДОМ ПОЛИМЕРАЗНОЙ ЦЕПНОЙ РЕАКЦИИ В РЕАЛЬНОМ ВРЕМЕНИ (RT-PCR) У ПАЦИЕНТОВ С ПЕРВИЧНЫМИ ОСТРЫМИ ЛЕЙКОЗАМИ

Республиканский Специализированный Научно-Практический Медицинский Центр Гематологии, Ташкент

Введение. Химерный ген BCR::ABL t(9;22) является маркером для диагно- стики хронического миелолейкоза (Ph+ ХМЛ) и острого лимфобластного лей- коза с Филадельфийской хромосомой (Ph+ ОЛЛ). Самой частой формой при ОЛЛ является белок р190 (70-85% среди всех Ph+ОЛЛ). Тем временем генети- ческой характеристикой острого промиелоцитарного лейкоза (ОПЛ) считает- ся сбалансированная реципрокная транслокация t(15;17) (q22;q11-12) с об- разованием химерного гена PML::RARα. Для молекулярной оценки BCR::ABL и PML::RARα в настоящее время разработаны количественные ПЦР-тесты (RQ- PCR), которые уже успели зарекомендовать себя и в настоящее время входят в стандарты диагностики первичных острых лейкозов.

Цель. Оценить значимость различных методов детекции транскрипта BCR::ABL р190 и PML::RARα для ранней верификации и прогнозирования ОЛ.

Материалы и методы. Дизайн настоящего исследования заключался в выявлении химерных генов BCR::ABL (р190) и PML::RARα t(15;17) и парал- лельном тестировании наборов для скрининга 7 хромосомных транслока- ции (t(1;19) (q23;p13) (TCF3-PBX1) t(4;11)(q21;q23) (KMT2A::AFF1), t(8;21) (q22;q22) (RUNX1::RUNX1T1), t(9,22)(q34;q11) (BCR::ABL), t(12;21) (p13;q22) (ETV6::RUNX1) t(15;17)(q24;q21) (PML::RARA), inv(16) (p13;q22) (CBFB::MYH11)) производства фирмы «HemaVision-7Q» (Дания) и BCR::ABL (р190) и PML::RARαt(15;17) производства компании geneMAPTM Translocation Detection Kits for Leukemia (Турция). В работе использовалась периферическая кровь пациен- тов с предварительным диагнозом ОЛЛ (n=46), а также пробы пациентов с ОПЛ (n=5). Для детекции химерных онкогенов BCR::ABL (р190) и PML::RARα использовали метод мультиплексной ПЦР в режиме «реального времени» (RT-PCR) на амплификаторах CFX96 (Bio-Rad, США) и Rotor-Gene Q (GIAGEN, Германия).

Результаты. Наши результаты показали, что из 46 пациентов с ОЛЛ у 8 выявлен положительный результат на наличие Филадельфийской хромосо- мы в изоформе р190 (17,4%). У троих пациентов с ОПЛ была отмечена поло- жительная проба на PML::RARα (6,52%). Результаты сравнительного анализа показали, что маркеры BCR::ABL (р190) и PML::RARα были обнаружены при обоих способах детекции, что свидетельствует об эквивалентности чувстви- тельности обеих тест-систем. Однако, расчетная себестоимость детекции BCR::ABL и PML::RARα при использовании набора «HemaVision-7Q» по сравне- нию “geneMAPTM Translocation Detection Kits for Leukemia” сокращается при- мерно в 2 раза за счет снижения трудоемкости, уменьшения количества ис- пользуемого лабораторного пластика и объема реакционной смеси.

Диагностическую специфичность тест систем “geneMAPTM Translocation Detection Kits for Leukemia” определили как процент условно здоровых па- циентов, имеющих отрицательные результаты по транскриптам BCR::ABL и PML::RARα, при исследовании 45 образцов РНК от условно здоровых пациен- тов она оказалась высокой (45/45) и составила 0,998%.

Выводы. Наше исследование показало важность применения высокочув- ствительных способов детекции химерных генов BCR::ABL p190 и PML::RARα, играющих ключевую роль в ранней диагностике и подборе эффективной терапии при ОЛ.

Б.В. Бидерман, А.В. Кохно, В.Н.Двирнык, Л.А.Кузьмина, А.Б.Судариков.

 МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА  СИНДРОМА VEXAS – ПЕРВЫЕ СЛУЧАИ В РОССИИ

Федеральное государственное бюджетное учреждение «Национальный медицинский исследовательский центр гематологии» Министерства здравоохранения Российской Федерации, Москва

Введение. Синдром VEXAS (вакуолизация, белок Е1, ассоциация с Х-хромосомой, аутовоспаление, соматическая мутация) – открытое в 2020 году заболевание, причиной которого являются соматические мутации в гене UBA1 в гемопоэтических стволовых клетках (ГСК) и в циркулирующих миелоидных клетках, но не в лимфоцитах. Т.к. данный ген располагается на Х-хромосоме, заболевание преимущественно встречается у мужчин старше 50 лет и у женщин с моносомией Х-хромосомы. Синдром VEXAS сочетает в себе проявления системного аутовоспаления с вовлечением различных органов и тканей, в зависимости от которых пациентам могут быть вери- фицированы различные диагнозы. Наиболее частыми гематологическими проявлениями заболевания являются макроцитарная анемия и /или тром- боцитопения, наличие вакуолизации в клетках миелоидного и эритроид- ного ростков кроветворения, которые в большинстве случаев становятся проявлениями миелодиспластического синдрома (МДС) или других гема- тологических заболеваний. Таким образом, пациентам старше 40 лет, при наличии системных аутоиммунных проявлений, при повышении СРБ более 15 г/л и наличии макроцитарной анемии и/или тромбоцитопении, вакуо- лизации клеток гранулоцитарного и эритроидного ростков кроветворения, а также верифицированного диагноза МДС необходимо тестирование на му- тации в гене UBA1.

Цель. Создать диагностическую систему для определения мутаций в гене UBA1, оценить с ее помощью частоту синдрома VEXAS на небольшой пилотной выборке больных с МДС и МДС/МПН.

Материалы и методы. В исследование включено 15 пациентов с МДС и МДС/МПН, наблюдавшихся в НМИЦ Гематологии с 2022 по 2025 гг., у ко- торых выявлялись признаки системного воспалительного процесса. Среди них – 12 мужчин (возраст 43-77 лет, медиана 58 лет), 3 женщины (43-73 года, медиана 53 года). Определение мутаций в гене UBA1 (3 экзон и прилежащие интроны) проводили с помощью секвенирования (высокопроизводитель- ного либо по методу Сэнгера).

Результаты. Из 15 исследованных пациентов у 5 (все мужчины, старше 50 лет) в ДНК, выделенной из клеток костного мозга, была выявлена му- тация гена UBA1. У двоих был обнаружен вариант c.A121G:p.M41V; у двоих – c.A121C:p.M41L и еще у одного – c.T122C:p.M41T (согласно литературным данным, самый частый вариант, ранее подтвержден у данного больного с помощью полногеномного секвенирования). Во всех случаях аллельная на- грузка мутаций была довольно высокой – более 80% в дебютном материале. У одного из пациентов был доступен материал в динамике на фоне тера- пии (азацитидин + метилпреднизолон + трансфузии эритромассы) – в трех пробах аллельная нагрузка значимо не уменьшалась, элиминации патоло- гического клона не происходило. После алло-трансплантации ГСК от род- ственного донора мутация перестала выявляться на фоне полного донорского химеризма. Вариант p.M41V, обнаруженный у двух больных, считается менее благоприятным, чем остальные, однако, ввиду очень малого объема выборки, мы не выявили значимых различий в проявлениях заболевания.

Выводы. С помощью разработанной нами системы для определения му- таций в гене UBA1 мы показали довольно высокую частоту встречаемости синдрома VEXAS среди больных МДС и МДС/МПН с признаками системного воспалительного процесса. Настороженность относительно VEXAS крайне важна для своевременного назначения оптимальной терапии, в настоящее время включающей три компонента: элиминацию патологического клона UBA1-мутантных клеток, системную противовоспалительную и поддержи- вающую терапию. Литературные данные показывают, что прогноз течения заболевания также может отличаться при разных вариантах мутаций гена UBA1 и их сочетании с другими генетическими нарушениями (например, мутациями в генах DNMT3A, TET2, SF3B1 и др.). Планируется продолжение изучения распространенности и спектра мутаций в гене UBA1, а также их сочетаний с другими генетическими изменениями и их влияние на течение заболевания.

Е.Н. Воропаева1,2, М.В. Бурундукова3, И.А. Кузнецова3, И.Н. Нечунаева3, В.Н. Максимов1,2, Т.И. Поспелова2

АНАЛИЗ СВОБОДНОЙ ЦИРКУЛИРУЮЩЕЙ ДНК ПРИ ОСТРОМ МИЕЛОИДНОМ ЛЕЙКОЗЕ

1Научно-исследовательский институт терапии и профилактической медицины – филиал Института цитологии и генетики Сибирского отделения РАН, Новосибирск

2Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования «Новосибирский государственный медицинский университет» Минздрава России, Новосибирск

3Государственное бюджетное учреждение здравоохранения Новосибирской области «Городская клиническая больница №2», Новосибирск

Введение. В последние годы активно изучаются возможности жидкост- ной биопсии в контексте диагностики и мониторирования широкого кру- га злокачественных новообразований. Анализ свободной циркулирующей ДНК (сцДНК) в плазме крови больных является возможной опцией для оценки прогрессирования заболевания и эффективности лечения у пациен- тов с острым миелоидным лейкозом (ОМЛ). Считается, что образцы боль- ных гемобластозами содержат больше сцДНК опухолевого происхождения, чем при солидных новообразованиях, поскольку злокачественные клетки естественным образом находятся в контакте с циркулирующей кровью.

Цель исследования – провести оценку концентрации и целостности сцД- НК в плазме крови пациентов с ОМЛ в различные этапы терапии заболевания. 

Материал и методы. Группу исследования составили 26 пациентов с ОМЛ. Цельную кровь забирали в специализированные пробирки для ста- билизации сцДНК PAXgene Blood ccfDNA Tube (QIAGEN, Германия) и обраба- тывали в соответствии с протоколом производителя в следующие времен- ные точки: на момент диагностики опухоли, констатации ремиссии и перед курсами консолидирующей/поддерживающей терапии. Выделение сцДНК проводили с помощью QIAamp MinElute ccfDNA Mini Kit (QIAGEN, Германия). Концентрацию и целостность сцДНК определяли методом количественной ПЦР на аппарате QuantStudio 5 (Applied Biosystems, СШA) в трех повторах с наработкой двух ампликонов различной длины гена ACTB.

Результаты. Средняя концентрация сцДНК у пациентов с впервые диа- гностированным ОМЛ составила 89,35±14,3 нг/мл, у достигших ремиссии – 11,47±5,46 нг/мл (р=0,046). Установлено, что целостность сцДНК пациен- тов с МОБ+ ремиссией значимо выше, чем у пациентов с МОБ– статусом в ремиссии ОМЛ (р=0,010).

Выводы. Установлено, что концентрация сцДНК у пациентов на момент диагностики ОМЛ характеризуется значительным разбросом значений, од- нако динамика данного показателя отражает характер течения опухолево- го процесса на уровне отдельных наблюдений. Полученные данные свиде- тельствуют о потенциальной ценности анализа количества и целостности сцДНК для отслеживания динамики течения ОМЛ.

Финансирование. Работа выполнена при поддержке гранта РНФ №25- 25-20030.

Е.Н. Воропаева1,2, М.В. Бурундукова3, И.А. Кузнецова2, И.Н. Нечунаева3, В.Н. Максимов1,2, Т.И. Поспелова1

НОВЫЕ ИНСЕРЦИИ В 12-М ЭКЗОНЕ ГЕНА NPM1

1Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования «Новосибирский государственный медицинский университет» Минздрава России, Новосибирск

2Научно-исследовательский институт терапии и профилактической медицины – филиал Института цитологии и генетики Сибирского отделения РАН, Новосибирск

3Государственное бюджетное учреждение здравоохранения Новосибирской области «Городская клиническая больница №2», Новосибирск

Введение. Более 95% инсерций в 12-м экзоне NPM1 у пациентов с острым миелоидным лейкозом (ОМЛ) представляют собой вставки четырех пар оснований типа A, B и D между 863 и 864 нуклеотидами кодирующей последо- вательности гена, остальные – другими редкими типами вставок различной локализации, протяженности и состава. В настоящее время в литературе описано более 60 типов инсерций в NPM1. Установлено, что редкие встав- ки не-ABD-типа имеют самостоятельное неблагоприятное прогностическое значение. Таким образом, накопление данных о новых редких вариантах ин- серций в данном гене имеет важное значение для совершенствования про- гноза и стратификации риска у больных лейкозом.

Цель. Представить данные о двух новых типах вставок в 12-м экзоне NPM1 при ОМЛ.

Материал и методы. Выполнялся ПЦР-скрининг и дальнейшее уточнение методом прямого капиллярного секвенирования инсерций в 12-м экзо- не гена NPM1 в выборке из 128 пациентов с de novo ОМЛ.

Результаты. В обследованной группе больных ОМЛ вставки типа А (р.W288Cfs*12, c.860_863dup) имели 16 человек, типа В (р.W288Cfs*12, c.863_864insCATG) – 1 пациент. В двух случаях верифицированы новые инсерции р.W290Kfs*10 и р.W288Cfs*12, ранее не описанные в доступ- ной литературе и базах данных, а именно: согласно номенклатуре Human Genome Variation Society NM_002520.7(NPM1) c.868_869insAAGC (p.Trp290fs) и NM_002520.7(NPM1): c.863_864insTGCT (p.Trp288fs), соответственно.

Вставка c.863_864insTGCT приводила к полному разрушению мотива сиг- нала ядрышковой локализации нуклеофосмина и формированию мотива сигнала экспорта из ядра, тогда как c.868_869insAAGC – формированию мо- тива сигнала экспорта из ядра с частичной утратой мотива сигнала ядрышковой локализации.

Выводы. Предполагается, что различные вставки в гене NPM1 могут при- водить к тонким функциональным различиям мутантного белка с различной степенью онкогенностью. Вместе с тем все описанные ранее, а также новые редкие, выявленные нами в рамках данной работы инсерции, несмо- тря на различия в локализации, протяженности и нуклеотидном составе, приводят к усиленному ядерному экспорту нуклеофосмина и определяют его цитоплазматическую локализацию.

Финансирование. Работа выполнена при поддержке Государственного задания №1024022700390-6-3.2.6;3.2.21 и бюджетной темы № FWNR-2024- 0004. 

Т.Н. Герт, В.Е. Солдатенков, А.В. Разумный, Д.В. Моторин, К.А. Комиссаров, Е.В. Мотыко, А.Н. Кириенко, Д.В. Кустова, И.В. Леппянен, И.С. Мартынкевич

ОСОБЕННОСТИ ИССЛЕДОВАНИЯ АЛЛЕЛЬНОГО ПОЛИМОРФИЗМА ГЕНОВ СИСТЕМЫ ГЕМОСТАЗА  И ФОЛАТНОГО ЦИКЛА У ПАЦИЕНТОВ ПОСЛЕ АЛЛОГЕННОЙ ТРАНСПЛАНТАЦИИ ГЕМОПОЭТИЧЕСКИХ  СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК

ФГБУ «Российский НИИ гематологии и трансфузиологии» ФМБА России, Санкт-Петербург, Российская Федерация

Введение. Геномную ДНК для диагностики полиморфизма генов систе- мы гемостаза и фолатного цикла рутинно выделяют из периферической крови пациента. Результат пациента после трансплантации гемопоэтиче- ских стволовых клеток (ТГСК) с подтвержденным 100% донорским химе- ризмом, полученный из образца ДНК периферической крови, представлен только донорским генетическим профилем, что не позволяет оценить вклад полиморфизма генов реципиента в генетические факторы риска дисфункции плазменного звена системы гемостаза и генов фолатного цикла и создает дополнительные риски нежелательных реакций.

Цель. Оценить особенности исследования и корректной интерпре- тации полиморфизма генов системы гемостаза и фолатного цикла для прогнозирования ожидаемых нежелательных реакций терапии для паци- ентов после аллогенной ТГСК, в частотности при планировании терапии препаратом «Метотрексат».

Материалы и методы. Геномную ДНК пациента до и после аллоген- ной ТГСК выделяли из 10 мл венозной крови, экстракция осуществлялась методом фенол-хлороформной экстракции. Молекулярно-генетическое исследование проводилось с помощью полимеразной цепной реакции в режиме реального времени в соответствии с инструкцией производи- теля («РеалБест-Генетика Гемостаз (12)» АО «Вектор-Бест») на приборе «CFX96».

Результаты. Выполнено исследование полиморфизма системы гемос- таза до и после аллогенной ТГСК пациентки Я.И.Б., жен., 1983 г.р. с диагно- зом В-ОЛЛ. Успешная аллогенная ТГСК проведена в апреле 2024 года, на момент исследования подтвержденный 100% донорский химеризм.

Генетический профиль реципиента до трансплантации: FII (G20210A) – Норма; FV (G1691A) – Норма; FGB (G455A) – Гетерозигота, PAI-1 (4G -6755G) – Мутация, FVII (G10976A) – Норма, FXIII (G103T) – Гетерозигота, ITGB3 (T1565C) – Норма; ITGA2 (C807T) – Гетерозигота, MTHFR (C677T) – Норма, MTHFR (A1298C) – Гетерозигота, MTRR (A66G) – Гетерозигота, MTR (A2756G) – Норма.

Генетический профиль реципиента после трансплантации: FII (G20210A) – Норма; FV (G1691A) – Норма; FGB (G455A) – Гетерозигота, PAI-1 (4G -675 5G) – Гетерозигота, FVII (G10976A) – Норма, FXIII (G103T) – Норма, ITGB3 (T1565C) – Норма; ITGA2 (C807T) – Норма; MTHFR (C677T) – Гетерозигота, MTHFR (A1298C) – Гетерозигота, MTRR (A66G) – Норма, MTR (A2756G) – Норма.

Терапия препаратом «Метотрексат» проводилась до (октябрь 2023) и после (август 2024) трансплантации в суммарных дозах 1600 мг В/В и 60 мг интратекально соответственно. Нежелательные явления от проведен- ной терапии до трансплантации проявились в виде токсической энцефа- лопатии, дизартрии, вестибуло-атактического синдрома, периферической полинейропатии 1 степени. При повторном применении препарата после проведенной трансплантации при дозах на два порядка меньше наблю- дались сходные нежелательные явления в сочетании с гематологической токсичностью 4 степени и мукозита 2 степени.

Препарат «Метотрексат» – строгий ингибитор метаболизма фолиевой кислоты, и одной из вероятных причин более яркого проявления нежела- тельные явлений от проводимой терапии на меньших дозах после ТГСК может являться появление у пациентки донорского полиморфизма гена фолатного цикла MTHFR (C677T) при наличии двух собственных полимор- физмов в генотипе пациентки, MTHFR (A1298C) и MTRR (A66G).

Выводы. Для корректной оценки генетических рисков и прогнозиро- вания ожидаемых нежелательных явлений у пациентов после аллогенной трансплантации важно проводить сравнительный анализ полиморфизма генов системы гемостаза и фолатного цикла реципиента и донора до про- ведения алло-ТГСК, используя геномную ДНК из периферической крови.

Рекомендуется в случае отсутствия информации о генетическом про- филе реципиента после проведения алло-ТГСК с подтвержденным 100% донорским химеризмом для определения аллельного полиморфизма генов системы гемостаза и фолатного цикла в качестве исследуемых образцов использовать буккальный эпителий (для оценки генетических рисков реципиента) и периферическую кровь (для оценки генетических рисков донора).

А.В. Голубева, А.Ю. Коваленко

ГЕНЕТИЧЕСКОЕ КОНСУЛЬТИРОВАНИЕ И ЭТИЧЕСКИЕ ПРОБЛЕМЫ, СВЯЗАННЫЕ С ПРЯМЫМ ГЕНЕТИЧЕСКИМ ТЕСТИРОВАНИЕМ

ФГБУ Российский научно-исследовательский институт гематологии и трансфузиологии Федерального медико-биологического агентства, Санкт-Петербург

Введение. Актуальность генетического тестирования в последние годы значительно возросла, привлекая внимание общественности, медицинских специалистов и академического сообщества. Однако этот рост интереса со- провождается критикой и скептицизмом со стороны экспертов в области медицины и генетики, так как затрагиваются важные вопросы безопасности и целесообразности таких тестов. Этические проблемы, возникающие в процессе генетического консультирования, требуют внимательного анализа, чтобы учесть как риски, так и потенциальные преимущества. Персонифицирован- ная медицина обещает изменить подход к медицинской помощи, рассматривая каждого пациента как уникальную биологическую личность. Однако, несмотря на перспективы, этот подход также порождает серьезные опасения, связанные с валидностью генетических тестов, чрезмерной акцентуацией на генетических факторах здоровья, генетическим профилированием, возможной дискриминацией со стороны страховых компаний и юридическими последствиями. В связи с этим, специалисты-генетики должны активно участвовать в обсуждениях о генетическом тестировании, что позволит продвигать этические принципы профессии и обеспечит населению доступ к преимуществам генетически ориентированной системы здравоохранения.

Цель. Целью данных тезисов является обоснование ценностей прямого генетического консультирования в контексте развития персонализирован- ной медицины.

Материалы и методы. Для подготовки тезисов были проанализированы и обобщены результаты исследований, опубликованных в научных журналах, а также данные из книг и других источников, доступных в электронных и печатных форматах. Критерии включения в анализ основывались на их актуальности, научной значимости и методологической строгости.

Результаты. Генетические тесты, ориентированные непосредственно на потребителя (DTC), становятся все более популярными и разнообразными. К основным типам тестов DTC относятся следующие тексты. Тесты на пред- расположенность к заболеваниям оценивают генетические варианты, кото рые могут указывать на повышенный риск развития определенных заболе- ваний, таких как диабет, сердечно-сосудистые заболевания или некоторые виды рака. Тесты на происхождение анализируют ДНК, чтобы определить этническое происхождение и родословную человека. Они могут предоста- вить информацию о предках и географическом распределении генов. Те- сты на переносимость и метаболизм исследуют, как организм усваивает и перерабатывает различные вещества, включая лекарства, витамины и дру- гие химические соединения. Например, некоторые тесты могут выявить генетическую предрасположенность к непереносимости лактозы или чув- ствительности к кофеину. Тесты на генетические мутации выявляют нали- чие конкретных мутаций, которые могут быть связаны с наследственными заболеваниями, такими как муковисцидоз или болезнь Хантингтона. Те- сты на фармакогенетику помогают определить, как организм человека ре- агирует на определенные лекарства, что может помочь в выборе наиболее эффективной терапии с минимальными побочными эффектами. Следуя рекомендациям медицинских организаций и консультируясь с экспертами, потребители могут более осознанно подходить к выбору и интерпретации результатов генетического тестирования. Генетическое тестирование DTC предполагает прямой маркетинг тестов без обращения к врачу. Не все те- сты имеют достаточную научную поддержку. Важно учитывать, как компа- нии обрабатывают и защищают личные генетические данные.

Выводы. Необходимо тщательное рассмотрение рисков и тревожных аспектов. Тестирование должно соответствовать стандартам медицинской помощи с клинической и этической точек зрения. Важно учитывать прямое и косвенное воздействие расширения доступности генетического тестирования DTC. Продвижение этических теорий и принципов поможет обеспечить насе- ление преимуществами генетически основанной системы здравоохранения.

Г.В. Гришина, Д.В. Ласточкина, А.Д. Касьянов, О.Ю. Матвиенко, И.С. Голованова

ОПРЕДЕЛЕНИЕ СТАТУСА АКТИВАЦИИ КОНЦЕНТРАТА ТРОМБОЦИТОВ

ФГБУ «Российский научно-исследовательский институт гематологии и трансфузиологии Федерального медико-биологического агентства», Санкт-Петербург

Введение. Развитие аллоиммунизации и в последующем рефрактерно- сти к трансфузиям донорских тромбоцитов значительно осложняет проведение адекватной современной терапии у онкогематологических больных. HLA-иммунизация приводит к разрушению антителами перелитых донор- ских тромбоцитов, что обуславливает необходимость увеличения кратности трансфузий и появление риска развития кровотечения у реципиента. Валиди- рованные стратегии выбора эффективных тромбоцитов для аллоиммунизи- рованных пациентов включают отбор HLA-совместимых доноров тромбоци- тов из регистров доноров. Микрочастицы дополняют функции тромбоцитов в гемостазе, тромбозе, онкологическом процессе и воспалении. Количество микрочастиц в тромбоцитах увеличивается в результате активации коагуля- ционного каскада или системы комплемента, а также под действием апопто- тических сигналов. Особый интерес вызывает возможность прогнозирования эффективности клинического применения концентрата тромбоцитов (КТ) на основании результатов исследования содержащихся в нем микрочастиц.

Цель работы. Изучить статус активации концентратов тромбоцитов в зависимости от среды заготовки, на плазме или в добавочном раствора SSP+. 

Материалы и методы. Исследован статус активации по тромбоцитар- ным микрочастицам 56 аферезных, лейкоредуцированных концентратов тромбоцитов, 25 образцов КТ на плазме, 31 – в растворе SSP+, на сроках хра- нения. Количество тромбоцитарных микрочастиц анализировали методом проточной цитометрии на цитометре CytoFlex (Beckman Coulter (США) с ис- пользованием анти– CD41 – APC к поверхностным маркерам тромбоцитов. Параметры метаболизма тромбоцитов измеряли с помощью анализатора газов крови ABL 800 FLEX (Radiometer Medical ApS, Дания). Различия считались достоверными при p <0,05.

Результаты. Количество тромбоцитов в КТ в день заготовки в исследуе- мых группах значимо не отличалось: на плазме 959,5*109 (504 – 1759) против 996,3*109 (581 – 1588) в добавочном растворе, что отвечает принятым стандар- там лабораторной оценки качества КТ. На пятые сутки уровень тромбоцитов также находился на одном уровне 962,2*109 против 979,2*109 соответственно. При оценке метаболического профиля в образцах КТ установлено, что на плаз- ме рН был почти постоянным в течение исследуемого периода 5 дней (7,101 против 6,996). Однако при заготовке КТ в добавочном растворе к концу срока хранения отмечалось снижение рН на 5,3 % (7,101 против 6,731). По мере увеличения времени хранения преобладает анаэробное дыхание, что приводит к повышению концентрации молочной кислоты и, следовательно, снижению рН. Снижение рН ниже принятых стандартов лабораторной оценки качества (< 6,4) было зафиксировано в 3-х случаях, 1 – на плазме, 2 – в добавочном растворе. Характеризуя уровень глюкозы в процессе хранения КТ в общеприня- тых условиях, отметим, что параметр значительно понижался независимо от среды: в 1,5 раза (19,9 против 12,38 ммоль/л) при заготовке на плазме и более чем 2,5 раза (7,46 против 2,67 ммоль/л) в добавочном растворе, что предполагает переход тромбоцитов в активированное состояние. Вероятно, глюкоза может быть более информативным маркером качества КТ, так как ее содержание показывает наличие питательного (энергетического) субстрата на сро- ках хранения, который необходим для поддержания процессов метаболизма в тромбоцитах на достаточном уровне. В течение времени хранения (1-5 сутки) выявлено непрерывное снижение глюкозы и повышение уровня лактата, что указывает на увеличение метаболических процессов при хранении КТ. При этом значение микрочастиц в КТ на плазме после заготовки было на уровне 9209,9 против 17531 в SSP+ (р = 0,059). Внутри групп к концу срока хранения отмечалось повышение концентрации тромбоцитарных микрочастиц (р<0,001). В то же время количество тромбоцитарных микрочастиц к концу срока хранения в обоих группах также значительно возрастало по сравнению с исходным: 35570 (10780 – 74905) в плазме против 45656 (13616 – 89451) в добавочном растворе, (р = 0,006), что свидетельствует об активации тромбоцитов. Следовательно, необходимо найти баланс и золотую середину между продлением времени хранения тромбоцитов, функцией in vitro и in vivo, а также жизнеспособностью in vivo. Для хирургических или травматологических пациентов трансфузии КТ, содержащих предварительно активированные тромбоциты, будут иметь хорошую эффективность ввиду реализации гемостатической функции для остановки острого кровотечения. Переливание неактивированных тромбоцитов с меньшим количеством микрочастиц и с меньшим сроком хранения для пациентов гематологического и онкологического профиля позволит снизить риск развития у них рефрактерности и положительно влиять на течение и исход заболевания.

Заключение. Оценка статуса активации концентрата тромбоцитов по уровню содержания микрочастиц позволит улучшить качество и эффективность проводимой трансфузионной терапии.

Ж. А. Гулмирзаев, М.М. Махмудова, М.О. Омонов, А.А. Яриев

АНАЛИЗ РОЛИ ПОЛИМОРФНОГО ЛОКУСА ГЕНОВ GSTМ1 И GSTТ1 В РАЗВИТИИ PH-НЕГАТИВНЫХ МИЕЛОПРОЛИФЕРАТИВНЫХ НЕОПЛАЗИИ

Республиканский научно-практический медицинский центр гематологии МЗ РУз, Ташкент

Актуальность. Ph– негативные миелопролиферативные неоплазии (МПН) – группа новообразований кроветворной ткани, включающая в себя эритремию (истинная полицитемия), эссенциальную тромбоцитемию и идиопатический миелофиброз. По данным литературы, кроме роли драй- верных мутаций (JAK2V617F, CALR и MPL), значительную долю в развитии и клиническом течении этих патологий имеют и гены глутатион S-трансфе- разы представляющие собой суперсемейство ферментов, катализирующих детоксикацию канцерогенов, различных химикатов и токсинов окружаю- щей среды. К настоящему времени крайне актуальным и важным является понимание значимости генов GSTМ1 и GSTТ1 и их возможный вклад в разви- тии, прогноза и течения МПН.

Цель. Изучить частоту встречаемости и влияние «нулевых» генотипов генов GSTМ1 и GSTТ1 на особенности формирования и прогноз Ph– негатив- ных МПН.

Материалы и методы. В исследование были включены 60 пациентов (от 20 до 65 лет) клинико-лабораторно и генетически подтвержденных случаев Рh– МПН (истинная полицитемия – 47, эссенциальная тромбоцитемия– 10, первичный миелофиброз – 3). Контрольную группу составили образцы ДНК 55 условно здоровых доноров без каких-либо онкологических патологий. Детекции мутации генов GSTМ1 и GSTТ1 проводили методом полимеразной цепной реакции с последующей электрофоретической детекцией. Ампли- фикацию проводили с использованием термоциклера Applied Biosystems 2700. В качестве инструмента вычислений использован пакет прикладных программ «OpenEpi 2009, Version 2.3».

Результаты. Для полиморфизмов GSTМ1 и GSTТ1 распределение частот генотипов в исследованных выборках больных и контроля соответствовало ожидаемому при равновесии Харди – Вайнберга. Установлено статистически не значимое различие в частоте встречаемости «нулевых» генотипов дан- ного локуса между общей группой больных МПН и контрольной выборкой. Среди больных «нулевые» генотипические варианты встречались с часто- той 47,3% и 15,4%, а в контрольной выборке 36,2% и 8,6%, соответственно. При сопоставлении частот «нулевых» генотипов и в GSTМ1 и в GSTТ1, выяв- лена тенденция к статистически значимому различию в их распределении, что свидетельствует о возможном вовлечении сочетанных генотипических вариантов локуса в патогенезе Рh– негативных МПН.

Обнаружено, что делеционный вариант по гену GSTT1 обнаружен у 13,8% (9/65) больных и у 9,1% – группы контроля (p>0.05), по гену GSTM1 у 28,3% (17/60) и 20,0% (11/55) соответственно (p>0.05). При сопоставлении частот «нулевых» генотипов для генов GSTМ1 и GSTТ1, выявлена тенденция к ста- тистически значимому различию в их распределении. Делеционный гено- тип одновременно в двух генах GST обнаружен у 6,1% пациентов с МПН и только у 1,8% индивидуумов группы контроля (OR=3.5; p=0,1).

Выводы. По предварительным данным функционально неблагоприят- ные «нулевые» генотипические варианты генов GSTМ1 и GSTТ1 не играют самостоятельную роль в патогенезе Ph– негативных МПН и не являются прогностическим маркером риска развития данных патологий. При сопо- ставлении частот сочетанной двойной нулевых генотипов, выявлена тен- денция к статистически значимому различию в их распределении. Для дальнейшего уточнения роли этих генов в развитии МПН необходимы дополнительные исследования.

А.А. Ершов, Г.А. Алимова, Л.А. Шишигина, Г.А. Исинова, Б.В. Бидерман, Е.С. Котова, И.В. Гальцева, А.Б. Судариков, О.А. Алешина, Т.Н. Обухова, Е.Н. Паровичникова

 ОСОБЕННОСТИ ДИАГНОСТИКИ И ЛЕЧЕНИЯ ВЗРОСЛЫХ ПАЦИЕНТОВ С BCR:ABL1-ПОДОБНЫМ ОСТРЫМ B-ЛИМФОБЛАСТНЫМ ЛЕЙКОЗОМ, ПОЛУЧАЮЩИХ ЛЕЧЕНИЕ ПО ПРОТОКОЛАМ ОЛЛ-2016 И ОЛЛ-2016M

ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр гематологии» Министерства здравоохранения Российской Федерации, Москва

Введение. В классификации Всемирной организации здравоохране- ния 2022 года была выделена новая подгруппа острого В-лимфобластно- го лейкоза (В-ОЛЛ) – BCR::ABL1-подобный В-ОЛЛ. Профиль экспрессии ге- нов при этом варианте заболевания практически идентичен таковому при BCR::ABL1-позитивном В-ОЛЛ, однако транслокация t(9;22)(q34;q11) не выявляется. В связи с отсутствием общепринятой диагностической панели BCR::ABL1–подобного В-ОЛЛ, верификация заболевания, зачастую, заклю- чается в исследовании наиболее частых перестроек в генах CRLF2, ABL1, ABL2, EPOR, CSF1R, JAK2. Для их выявления могут быть применены такие методы лабораторной диагностики, как флуоресцентная гибридизация in- situ (FISH), проточная цитометрия и полимеразная цепная реакция, преиму- щество которых состоит в быстром получении результата и доступности по сравнению с дорогостоящими методами, такими как секвенирование ново- го поколения, cеквенирование транскриптома или «золотого стандарта» – вариантов экспрессионного анализа с помощью микрочипов, ограниченных в широком применении из-за низкой доступности оборудования и сложно- сти интерпретации данных. Разными исследовательскими группами было показано, что у пациентов с BCR::ABL1-подобным В-ОЛЛ показатели как по частоте достижения ремиссии, так и долгосрочным результатам выживаемости значимо хуже, что свидетельствует о необходимости модификации химиотерапевтических программ (включение таргетных препаратов и/или моноклональных антител) и, возможно, выполнении трансплантации алло- генных гемопоэтических стволовых клеток.

Цель. Сравнить частоту встречаемости маркеров BCR::ABL1–подобного В-ОЛЛ у пациентов с de novо В-ОЛЛ, которые получили лечение по протоко- лам ОЛЛ-2016 и ОЛЛ-2016m.

Материалы и методы. Маркеры BCR:ABL1-подобного В-ОЛЛ методом FISH с применением ДНК-зондов (breakapart) Cytocell (Великобритания) для выявления транслокаций (t) с вовлечением генов CRLF2, ABL1, ABL2, EPOR, CSF1R, JAK2 были исследованы у 36(45%) из 80 пациентов в дебюте заболевания, у которых были исключены t(9;22)(q34;q11), t(1;19)(q23;p13), t MLL/11q23, гипер– и гиподиплоидия. Все пациенты получили лечение в рамках многоцентрового исследования «ОЛЛ-2016» с декабря 2016 по но- ябрь 2019 гг. Cоотношение мужчин и женщин (м:ж) – 18 (50%):18(50%). Ме- диана возраста составила 33(18-51) года.

Лечение по протоколу ОЛЛ-2016m получили 45 пациентов в период с июля 2022 по январь 2025 гг. Cоотношение м:ж – 18(40%):27(60%). Медиа- на возраста – 34(21-54) года. Маркеры BCR:ABL1-подобного В-ОЛЛ методом FISH с применением ДНК-зондов (breakapart) Wuhan HealthCare Biotechnology Co. (Китай) к тем же генам были исследованы только у 23(51%) пациентов, у которых был подтвержден МОБ-позитивный (МОБ+) статус на 70 день те- рапии, в схему их лечения включен 1 курс блинатумомаба.

Анализ МОБ выполняли с применением 6-11-цветной проточной цито- метрии на приборах FACSCanto II (BD Biosciences, США) и CytoFLEX (Beckman Coulter, США).

Результаты. Маркеры BCR:ABL1-подобного В-ОЛЛ были выявлены у 4(11%) пациентов из протокола ОЛЛ-2016: 2(50%) случая – t CRLF2 (1 из них умер на этапе индукционной терапии, у 2-го пациента был подтверж- ден МОБ+ статус на 70 день и пациент погиб в результате рефрактерного течения рецидива заболевания); 1(25%) – t JAK2 (развитие ранней леталь- ности); 1(25%) – t ABL1 (пациент достиг МОБ-негативный статус на 70 день и находится под наблюдением). У 6 (26%) из 23 пациентов с МОБ+ стату- сом из протокола ОЛЛ-2016m были выявлены маркеры: 4(67%) – t CRLF2; 1(16,5%) – t ABL1; 1(16,5%) – t PDGFRB. Ни у одного пациента не развился рецидив заболевания. Значимых различий в частоте встречаемости мар- керов BCR::ABL1-подобного В-ОЛЛ у пациентов из протоколов ОЛЛ-2016 и ОЛЛ-2016m не получено (p=0,135).

Заключение. Метод FISH может применяться для диагностики наиболее часто встречающихся маркеров BCR::ABL1–подобного В-ОЛЛ. Включение впрограмму лечения ОЛЛ-2016m блинатумомаба у пациентов из группы вы- сокого риска (персистенция МОБ по окончании индукционной терапии) как с маркерами BCR::ABL1–подобного В-ОЛЛ, так и без них, позволило достичь сопоставимых результатов выживаемости на сроках наблюдения 2 года.

А.А. Каюмов1, М.Б. Зокирова2

ПРОГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ КАРДИОЛОГИЧЕСКИХ ОСЛОЖНЕНИЙ ПОЛИМОРФИЗМА АНТИОКСИДАНТНОЙ  ЗАЩИТЫ SOD2 У БОЛЬНЫХ С ОЛЛ

1Республиканский специализированный научно-практический медицинский центр гематологии, Ташкент

2Ташкентская медицинская академия, Ташкент

Введение. На сегодняшний день самой частой причиной развития ос- ложнений при острых миелоидных лейкозах по-прежнему являются заболевания сердечно-сосудистой системы. Учитывая большое количество ме- ханизмов приводящие к развитию кардиотоксичности, которые влияют на тяжесть и течение осложнений, в настоящее время требуются дополнительные исследования данного вопроса. Одним из ведущих механизмов патогенеза развития кардиотоксичности является нарушение системы антиокси- дантной защиты.

Цель. Изучение и оценка роль полиморфизма C14510A гена фермента антиоксидантной защиты SOD2 в развитии кардиотоксических осложнений у больных с острыми лейкозами.

Материалы и методы. Исследование проведено в клинических отделениях центра, у 87 пациентов с клинически, лабораторно-генетически под- тверждеными острыми лейкозами. У 47 пациентов был верифицирован острый миелобластный и у 40 больных острый лимфобластный лейкоз. Согласно утвержденным клиническим протоколам, все пациенты получали двух или трехкомпонентную химиотерапию. В качестве контроля использо- вали образцы ДНК условно–здоровых неродственных лиц узбекской наци- ональности (n=90).

Результаты. По полученным результатам исследования, между полимор физмом C14510A гена SOD2 и развитием кардиотоксических осложнений не было установлено четкой зависимости (χ2=0,8; р=0,8; OR=1,7; 95%CI=0,54- 5,48). Аллельные варианты данного гена и в основной, и в контрольной группах встречались относительно равномерно (С аллель в основной груп- пе 69%, в контрольной 73%, А аллель 31% и 23% соответственно). Следует отметить, что, генотипические варианты С/С, С/А и А/А в группе больных значилась: 47,1%, 43,7% и 9,2% против 60%, 34,4% и 5,6% соответственно. При сравнении частоты встречаемости неблагоприятных генотипов С/А и А/А в группах, статистически достоверных различия не определилось (р=0,2 и р=0,7).

Выводы. В развитии кардиотоксических осложнений полиморфизм C14510A гена SOD2 не играет самостоятельной роли и не является значи- мым прогностическим маркером для прогнозирования развития острых лейкозов.

А.Н. Кириенко1, Е.В. Мотыко1, Д.В. Кустова1, Е.В. Ефремова1, В.А. Шуваев2,3, И.С. Мартынкевич1

PH-НЕГАТИВНЫЕ МИЕЛОПРОЛИФЕРАТИВНЫЕ НОВООБРАЗОВАНИЯ: ГЕНЕТИЧЕСКИЕ МАРКЕРЫ  И ИХ КЛИНИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ

1ФГБУ «Российский научно-исследовательский институт гематологии и трансфузиологии Федерального медико-биологического агентства», Санкт-Петербург

2Медицинский радиологический научный центр им. А.Ф. Цыба, Обнинск

3Российская медицинская академия последипломного образования, Москва

Введение. К классическим Ph-негативным миелопролиферативным новообразованиям (МПН) относятся первичный миелофиброз (ПМФ), эс- сенциальная тромбоцитемия (ЭТ) и истинная полицитемия (ИП). Генетиче- ский ландшафт этих заболеваний широк и не ограничен только мутациями в драйверных генах JAK2, CALR и MPL. Современная технологии NGS и клас- сический цитогенетический анализ кариотипа позволят описать мутацион- ный ландшафт и оценить влияние генетических изменений на эффектив- ность таргетного препарата Руксолитиниба.

Материалы и методы. Исследовано 178 пациентов (69 мужчин и 109 женщин) в возрасте от 19 до 88 лет (Me=54 года). Диагноз Ph-МПН был ранее установлен для всех 178 человек – 54 пациента с ЭТ, 48 с ИП, 76 с ПМФ. Секве- нирование выполнялось с использованием миелоидной панели из 118 ге- нов со средней глубиной прочтения 1000х на приборе MiSeq (Illumina). При анализе полученных данных применялся 3% порог частоты встречаемости аллеля (VAF). Клиническая значимость мутаций (патогенная, доброкаче- ственная или неясного значения) устанавливалась по базам данных COSMIC и Franklin. Хромосомный анализ проводили с использованием свежих аспи- ратов костного мозга и G-бэндинга с окраской трипсином. Для статистического анализа был использован метод Каплана-Мейера, статистическая зна- чимость оценивалась с помощью критериев Кокса-Мантела и хи-квадрат.

Результаты. Общая выживаемость (ОВ) среди трех групп была ниже у пациентов с ПМФ (p <0,0001). У пациентов с ИП наблюдалась более ранняя прогрессия во вторичный миелофиброз, чем у пациентов с ЭТ (p=0,0468).

Возраст старше 65 лет являлся фактором, ассоциированным со сниже- нием ОВ, для всех трех групп пациентов (ПМФ – 0,0141, ЭТ – 0,0104, ИП – 0,0096). ОВ пациентов всех трех заболеваний не ассоциировалась с полом (ПМФ – 0,2094, ЭТ – 0,7066, ИП – 0,7818).

Среди пациентов с драйверной мутацией JAK2 наибольшее снижение ОВ наблюдалось у пациентов с ПМФ (p=0,0062). Для групп с ПМФ и ЭТ не было показано такой закономерности для пациентов с драйверными мутациями CALR или MPL. Гомозиготная мутация в гене JAK2 (VAF>50%) не ассоцииро- валось со снижением ОВ или беспрогрессивной выживаемости (БВ) ни у од- ной из трех групп.

Дополнительные патогенные мутации были выявлены в 32 генах у 45% пациентов (80/178) (19/54 с ЭТ, 20/48 с ИП, 41/76 у ПМФ). Тенденция к снижению ОВ при сочетании драйверной и патогенных мутаций была от- мечена для ИП (p=0,0971) и строго ассоциировалась для пациентов с ПМФ (p=0,0399) и ЭТ (p=0,0316). Для всех трех заболеваний сочетание драйверной и патогенных мутаций ассоциировалось со снижением БВ (ПМФ p=0,0471, ЭТ p <0,0001, ИП p=0,0291). Количество патогенных мутаций большее или равное 2 ассоциировалось со снижением БВ по сравнению с меньшим ко- личеством мутаций для всех групп заболеваний (ПМФ – 0,0008, ЭТ – 0,0109, ИП – <0,0001). У пациентов с ПМФ, когда-либо принимавших Руксолитиниб, наличие 2 и более патогенных мутаций ассоциировалось со снижением ОВ (Me=7,92 против Me=13,18 у пациентов без или с 1 патогенной мутацией, p=0,0199) и БВ (p=0,0203). Такая закономерность не была показана для па- циентов с ЭТ (для ОВ – 0,4795, для БВ – 0,1718), для пациентов с ИП, полу- чавших Руксолитиниб, наличие 2 и более патогенных мутаций ассоцииро- валось со снижением БВ, но не ОВ (p=0,0237, p=0,6015 соответственно).

Цитогенетический анализ был проведен 47/76 пациентам с ПМФ, 30/54 с ЭТ, 28/48 с ИП. Дополнительные хромосомные аберрации (ДХА) были вы- явлены у 9/47 пациентов с ПМФ, 4/28 с ИП и ни у одного пациента с ЭТ. На- личие хромосомной аберрации ассоциировалось со снижением ОВ и БВ для пациентов с ПМФ и ИП (p=0,0023 и p=0,0293, p=0,0205 и p=0,001). Для паци- ентов с ПМФ, когда-либо принимавших Руксолитиниб, наличие ДХА ассоци- ировалось со снижением ОВ и имело тенденцию к снижению БВ (p=0,0106 и p=0,0526). Для пациентов с ИП такая закономерность не прослеживалась (p=0,9999 и p=0,2163). Для группы ПМФ наличие цитогенетических нарушений достоверно чаще встречалось у пациентов с одной и более патогенны- ми мутациями (p=0,0191).

Выводы. Сочетание цитогенетического исследования и анализ мутаций методом NGS позволяют прогнозировать течение заболевания и оценивать эффективность проводимой терапии.

А.Н. Кириенко1, Е.В. Мотыко1, Д.В. Кустова1, Е.В. Ефремова1, В.А. Шуваев2,3, И.С. Мартынкевич1

 СРАВНЕНИЕ ГЕНЕТИЧЕСКОГО ЛАНДШАФТА КЛАССИЧЕСКИХ PH-НЕГАТИВНЫХ МИЕЛОПРОЛИФЕРАТИВНЫХ НОВООБРАОВАНИЙ  МЕТОДОМ СЕКВЕНИРОВАНИЯ СЛЕДУЮЩЕГО ПОКОЛЕНИЯ (NGS)

1ФГБУ «Российский научно-исследовательский институт гематологии и трансфузиологии Федерального медико-биологического агентства», Санкт-Петербург

2Медицинский радиологический научный центр им. А.Ф. Цыба, Обнинск

3Российская медицинская академия последипломного образования, Москва

Введение. Ph-негативные миелопролиферативные новообразования (Ph-МПН) – истинная полицитемия (ИП), эссенциальная тромбоцитемия (ЭТ) и первичный миелофиброз (ПМФ) характеризуются гиперпролифера- цией одной или нескольких клеточных линий и склонностью к развитию миелофиброза или трансформацией в острый миелоидный лейкоз. На гене- тическом уровне развитие данных заболеваний определяется, но не огра- ничивается постоянной активацией JAK-STAT сигнального пути, к которой приводят драйверные мутации в генах JAK2, CALR и MPL. Однако, генетиче- ский ландшафт Ph-МПН включает в себя мутации в множестве других генов. 

Цель. Сравнить генетический ландшафт Ph-МПН с использованием метода секвенирования следующего поколения (NGS).

Материалы и методы. Исследовано 178 пациентов (69 мужчин и 109 женщин) в возрасте от 19 до 88 лет (Me=54 года). Диагноз Ph-МПН был ра- нее установлен у всех 178 человек – 54 пациента с ЭТ, 48 с ИП, 76 с ПМФ. Секвенирование выполнялось с использованием миелоидной панели из 118 генов со средней глубиной прочтения 1000х на приборе MiSeq (Illumina). При анализе полученных данных применялся 3% порог частоты встречае- мости аллеля (VAF). Клиническая значимость мутаций (патогенная, добро- качественная или неясного значения) устанавливалась по базам данных COSMIC и Franklin. Для статистического анализа был использован метод Ка- плана-Мейера, статистическая значимость оценивалась с помощью крите- риев хи-квадрат и t-критерия Уэлча.

Результаты. Драйверные мутации были выявлены у 157 пациентов (44/54 с ЭТ, 48/48 с ИП, 65/76 с ПМФ). Как и ожидалось, мутация V617F в гене JAK2, встречалась чаще у пациентов с ИП, чем у пациентов с ПМФ (p=0,0001) или с ЭТ (p=0,0001). Важно отметить, что мутация в гене JAK2 являлась го- мозиготной (VAF>50%) достоверно чаще у пациентов с ИП, чем с ПМФ или ЭТ или в паре ПМФ/ЭТ (p=0,0195, p <0,0001 и p=0,0254 соответственно).

Не было выявлено разницы по частоте пациентов с тринегативным ста- тусом или встречаемости мутаций в генах MPL и CALR между пациентами с ЭТ и ПМФ (p=0,63, p=0,48 и p=0,5 соответственно). Однако наличие мутации в гене CALR ассоциировалось с наличием дополнительных патогенных му- таций чаще у пациентов с ПМФ, чем у пациентов с ЭТ (p=0,0474).

Дополнительные патогенные мутации были выявлены в 32 генах у 45% пациентов (80/178) (19/54 с ЭТ, 20/48 с ИП, 41/76 у ПМФ). Общая частота патогенных мутаций была наиболее высокой у пациентов с ПМФ – 1,026 мутированных гена на пациента (ИП – 0,5625, ЭТ – 0,4259). Таким образом, мутационная нагрузка достоверно больше у пациентов с ПМФ, чем у паци- ентов с ЭТ или ИП, или при сравнении ИП/ЭТ (p=0,0051, p=0,0521, p=0,4311). Не было выявлено разницы по частоте встречаемости дополнительных патогенных мутаций между ПМФ/ИП (p=0,1827) и ИП/ЭТ (p=0,5445). При этом дополнительные патогенные мутации достоверно чаще встречались у пациентов с ПМФ, чем с ЭТ (p=0,0492). Пациенты с двумя и более патогенны- ми мутациями чаще обнаруживались в группе с ПМФ, чем с ИП или ЭТ, или при сравнении ИП/ЭТ (p=0,0393, p=0,0033 и p=0,3405 соответственно). При этом пациенты с 3 патогенными мутациями выявлялись только в группах с ПМФ (n=9) и ИП (n=1), пациенты с 4 патогенными мутациями только в группе с ПМФ (n=3).

Наиболее часто патогенные мутации выявлялись в генах, ответственных за эпигенетическую регуляцию (ASXL1, EZH2, PHF6, EP300, SUZ12 – модифи- кации хроматина, DNMT3A, IDH1, IDH2 и TET2 – метилирования ДНК) во всех трех группах (11/54 ЭТ, 15/48 ИП, 39/76 ПМФ). При этом, мутации в генах, ответственных за модификацию хроматина, встречались чаще у пациентов с ПМФ (23/53), чем с ИП (7/41) или ЭТ (3/52), или при сравнении ИП/ЭТ (p=0,047, p <0,0001 и p=0,07 соответственно).

Выводы. NGS позволяет выявить дополнительные патогенные мутации у пациентов с Ph-МПН. Данные заболевания различаются между собой по частоте встречаемости вариационного аллеля JAK2, по мутационной нагруз- ке патогенными мутациями и частоте встречаемости патогенных мутаций в целом, так и мутаций в генах, ответственных за регуляцию хроматина. NGS может послужить удобным инструментом в диагностике Ph-МПН.

А.Ю. Коваленко, А.Д. Касьянов, А.В. Голубева

РОЛЬ МИКРОЧАСТИЦ ТРОМБОЦИТОВ В ОНКОГЕМАТОЛОГИИ: ИССЛЕДОВАНИЕ МЕТОДЫ ОЦЕНКИ

ФГБУ Российский научно-исследовательский институт гематологии и трансфузиологии Федерального медико-биологического агентства, Санкт-Петербург

Введение. Переливание тромбоцитного концентрата (ТК) является важным компонентом заместительной терапии у пациентов с онкогема- тологическими заболеваниями и тяжелыми формами тромбоцитопений. Однако накопленные данные свидетельствуют о том, что высокое содер- жание микрочастиц тромбоцитов (ТМЧ) в ТК может оказывать неблаго- приятное влияние на течение онкологических заболеваний. Одним из ключевых механизмов, обуславливающих противопоказание к примене- нию таких концентратов, является их влияние на опухолевый процесс через перенос микроРНК (miRNA). ТМЧ представляют собой мембранные везикулы, образующиеся при активации или апоптозе тромбоцитов. Они являются биологически активными структурами, способными модулиро- вать межклеточные взаимодействия, передавая белки, липиды и некоди- рующие РНК. В частности, микроРНК, находящиеся в составе ТМЧ, могут оказывать значительное влияние на клетки опухолевой ткани, изменяя их фенотип, стимулируя ангиогенез, повышая устойчивость к химиотерапии и способствуя уклонению от иммунного ответа. ТМЧ могут быть важным посредником в прогрессии опухоли. В их составе обнаружены проангио- генные микроРНК (miR-126, miR-21), которые усиливают васкуляризацию опухолевой ткани через активацию сигнальных путей VEGF. Другая груп- па микроРНК (miR-223, miR-181b) способствует эпителиально-мезенхи- мальному переходу (EMT), повышая миграционный потенциал опухоле- вых клеток и их способность к метастазированию. Кроме того, miR-146a и miR-21 подавляют активность цитотоксических T-клеток и естествен- ных киллеров (NK-клеток), снижая способность организма распознавать и уничтожать опухолевые клетки. Это особенно актуально в контексте иммунотерапии, поскольку повышенная концентрация ТМЧ в крови он- кологических больных может снижать эффективность терапии. С практической точки зрения, контроль за содержанием тромбоцитарных микро- частиц в ТК является критически важным для минимизации возможных неблагоприятных эффектов.

Цель. Обосновать противопоказания к переливанию тромбоцитарного концентрата с высоким содержанием микрочастиц у онкогематологиче- ских пациентов через их микроРНК-опосредованное влияние на опухоле- вый процесс и оценить возможность применения ДРС для быстрого кон- троля качества концентрата.

Материалы и методы. Для оценки содержания ТМЧ в ТК использовал- ся анализатор размеров частиц Zetasizer Nano ZS (Malvern, Великобрита- ния).

Результаты. В ходе исследования был проведен анализ содержания ТМЧ в ТК с использованием метода ДРС. Полученные данные подтвержда- ют, что концентрация ТМЧ увеличивается в процессе хранения, причем этот процесс зависит от температуры хранения и исходного уровня ТМЧ. Для количественной оценки изменений в образцах был использован ин- тегральный показатель TLScore. Чем выше значение TLScore, тем меньше содержание микрочастиц и тем выше качество концентрата.

При хранении ТК при температуре 22°C среднее значение TLScore на 1-й день составило 11,22, что соответствует относительно низкому содер- жанию ТМЧ. На 3-й день хранения показатель снизился до 9,72 при 22°C и 8,96 при 4°C, а на 7-й день — до 8,34 и 7,75 соответственно. Эти результаты демонстрируют, что хранение при 4°C способствует более быстрому уве- личению количества микрочастиц по сравнению с 22°C, что может быть связано с изменением свойств мембран тромбоцитов при более низкой температуре и их повышенной подверженностью фрагментации. Анализ показал, что более стабильными являются концентраты, не подвергавши- еся процедуре патогенредукции, а также те, которые изначально содержа- ли меньшее количество ТМ. Однако, независимо от условий хранения, для всех образцов характерно постепенное накопление микрочастиц, наибо- лее выраженное в промежутке между 3-м и 7-м днями хранения. Это под- черкивает необходимость строгого контроля качества ТК перед трансфу- зией, особенно у онкогематологических пациентов.

Выводы. Исследования подтвердили, что высокая концентрация микрочастиц тромбоцитов в ТК ухудшает течение онкологических заболеваний через микроРНК-опосредованные механизмы. Увеличение числа ТМЧ во время хранения акцентирует важность их контроля в ТК для минимизации рисков. Метод ДРС доказал свою пригодность для быстрого анализа состава ТК, что позволяет своевременно принимать меры для обеспечения безопасности трансфузионной терапии у онкогематологических больных.

 Ж.М. Козич1, Т.В. Руденкова2, Н.Н. Климкович2, С.А. Костюк2, Ж.Н. Пугачева1

 АССОЦИАЦИЯ ПОЛИМОРФНЫХ ВАРИАНТОВ ГЕНОВ NRAS, KRAS, BRAF С КЛИНИКО-ЛАБОРАТОРНЫМИ ПОКАЗАТЕЛЯМИ ПРИ МНОЖЕСТВЕННОЙ МИЕЛОМЕ

1Государственное учреждение «Республиканский научно-практический центр радиационной медицины и экологии человека», г. Гомель, Республика Беларусь, 2Учреждение образования «Белорусский государственный медицинский университет», г. Минск, Республика Беларусь

Введение. Множественная миелома (ММ) – гетерогенное заболевание, проходящее в своем развитии многоступенчатый процесс трансформации клеток, и характеризующееся высокой степенью разнообразия характери- стик на молекулярно-генетическом уровне. Молекулярные характеристики ММ высоко гетерогенны, т.к. в основе ее развития лежат множественные молекулярно-генетические изменения в плазматических клетках. Знания в области патогенеза ММ значительно расширились, благодаря применению новых методов диагностики, включающих молекулярно-генетические ис- следования на основе ПЦР.

Цель. Проанализировать частоту встречаемости полиморфизмов в генах NRAS, KRAS, BRAF у пациентов с впервые выявленной ММ и оценить их ассо- циацию с клинико– лабораторными показателями.

Материалы и методы. В исследование включено 55 пациентов с впер- вые выявленной ММ, проходивших обследование в ГУ «РНПЦ РМиЭЧ» (г. Гомель), среди них 28 женщин (50,91%) и 27 мужчин (49,09%), медиана воз- раста составила 64,0 (56,0/70,0) года. Для выявления полиморфизмов в ге- нах NRAS, KRAS, BRAF использовали ДНК, выделенную из образцов костного мозга пациентов с ММ. Исследования проводили с применением метода ПЦР в режиме реального времени с использованием специфических последова- тельности праймеров и TaqMan-зондов, с последующим анализом кривых плавления высокого разрешения. Дополнительно проводили электрофоре- тический анализ полученных ампликонов и идентификацию выявленных полиморфизмов методом сиквенс-анализа по Сэнгеру.

Результаты. Среди обследованных пациентов с впервые выявленной ММ для гена NRAS частота выявления полиморфизмов в составе гетеро- зиготных и мутантных геновариантов составила от 20,00% (rs121913254) до 23,64% (rs11554290). Для гена KRAS – от 16,36% (rs112445441) до 30,91% (rs121913529) и 30,92% (rs121913530). Для гена BRAF – 21,82% (rs113488022). Сочетание 2 мутаций обнаружено в 16,36% случаев, 3 мута- ций – у 7,27% обследованных. У пациентов с ММ полиморфизмы в гене KRAS были ассоциированы с повышенной секрецией IgA (мутантный СС генотип при замене с.34G>С), с поражением костей без экстрамедуллярных очагов (мутантный С-аллель при замене с.34G>С), а также с множественными изме- нениями в костях и наличием экстрамедуллярных поражений (мутантный Т-аллель при замене с.35G>T). Для генов BRAF и NRAS достоверных ассоциа- ций с клинико-лабораторными показателями установлено не было. Однако, сочетанное носительство полиморфизмов c.1799T>A в гене BRAF и 181C>A в гене NRAS было зафиксировано у пациентов с ухудшением прогноза.

Выводы. Установлен высокий уровень распространенности полимор- физмов в генах NRAS, KRAS, BRAF у пациентов с впервые выявленной ММ, что подтверждает геномную нестабильность/вариабельность среди паци- ентов с данной патологией. В ходе проведенных исследований не выявлено ассоциации изученных полиморфизмов в генах NRAS, KRAS, BRAF с прогно- зом течения ММ.

К.А. Комиссаров1,2, К.В. Игнашев2, Т.Н. Герт1, С.С. Бессмельцев1, В.Е. Солдатенков1

ФАКТОРЫ РИСКА ТРОМБОЗОВ АРТЕРИАЛЬНЫХ РЕКОНСТРУКЦИЙ: НАСЛЕДСТВЕННЫЕ И ПРИОБРЕТЕННЫЕ АСПЕКТЫ

1ФГБУ «Российский НИИ гематологии и трансфузиологии» ФМБА России, Санкт-Петербург, Российская Федерация

2ФГБОУ ВО «Санкт-Петербургский государственный педиатрический медицинский университет» МЗ РФ, Санкт-Петербург, Российская Федерация

Введение. Высокая распространенность хронических облитерирующих заболеваний артерий нижних конечностей привела к увеличению числа и разнообразия сосудистых реконструктивно-восстановительных опера- ций. С ростом количества таких вмешательств возросло и число пациентов, нуждающихся в повторных операциях из-за реокклюзий и рестенозов в восстановленных артериальных сегментах. Основными причинами повтор- ных хирургических вмешательств являются тромбозы и рестенозы в зоне реконструкции. Важную роль в развитии тромбообразования играют на- рушения системы свертывания крови. В последние десять лет проводятся исследования, направленные на выявление генов, влияющих на развитие сердечно-сосудистых заболеваний и их осложнений. Изменения в плазменном и тромбоцитарном звеньях гемостаза имеют как генетическую, так и фенотипическую природу. Однако вклад нарушений гемостаза в увеличе- ние риска артериальных тромбозов до сих пор не установлен однозначно.

Цель работы. Исследовать влияние показателей системы гемостаза на развитие окклюзий в зонах реконструкции артерий.

Материал и методы. Обследовано 70 пациентов, перенесших реваску- ляризирующие операции на артериях подвздошно-бедренно-подколенного сегмента. Средний возраст составил 64 года. Хроническая артериальная не- достаточность варьировала от IIб до III стадии по классификации Покров- ского-Фонтейна. Клинико-инструментальное обследование включало УЗДС артерий нижних конечностей с измерением лодыжечно-плечевого индекса (ЛПИ). Лабораторные исследования включали клинический анализ кро- ви, биохимический анализ, липидограмму и расширенную коагулограм- му (АПТВ, ПТИ, тромбиновое время, фибриноген, активность фактора VIII (FVIII), FIX, фактора Виллебранда (FW), активность антитромбина III, проте- ина C и протеина S). Также определяли уровень гомоцистеина и наличие ан- тифосфолипидных антител волчаночного типа. Молекулярно-генетическое исследование факторов гемостаза проводилось с помощью ПЦР (факторы II, V, I, PAI-1, MTHFR).

Результаты. Прогрессия атеросклероза артерий нижних конечностей с осложнениями в виде тромбозов зон реконструкций потребовало ампута- ции у 7 пациентов (10%) в течение 12 месяцев. У 20% пациентов было вы- явлено сочетание гетерозиготной мутации в гене FII (G20210A) и полимор- физма 455 G/A в гене фактора I (FI). Мутация FV G1691A была обнаружена у 14 пациентов; из них у 5 (7,14%) развились ранние послеоперационные тромбозы зон реконструкции в течение месяца, что потребовало повтор- ного вмешательства. Полиморфизм 455G/A в гене фактора I приводил к повышению концентрации фибриногена у обследованных больных. Поли- морфизмы PAI-1 и MTHFR не оказывали влияния на первичную и вторич- ную проходимость зон реваскуляризации. Гиперфибриногенемия была ха- рактерна для 21 пациента (30%), средний уровень фибриногена составил 4,3 г/л. У 39 (55,7%) пациентов наблюдалось увеличение активности FW и FVIII при нормальном уровне естественных антикоагулянтов: протеина C, S и антитромбина III. Вторичная проходимость зон реваскуляризации через 2 года составила 84% для всей группы; среди пациентов с мутацией в гене протромбина (G20210A) или мутацией Лейден FV G1691A вторичная про- ходимость составила 66%. Окклюзии бедренных артерий без возможности повторной реконструкции были зафиксированы в 11 случаях (15,7%)

Наличие известных факторов риска венозных тромбоэмболических осложнений является предиктором неблагоприятного прогноза для первичной и вторичной проходимости зон реконструкций. Мутации в генах протромбина (G20210A) или FV G1691A увеличивают риск тромбоза зоны реконструкции на отдаленных сроках. Повышенные уровни фибриногена и активности FW и FVIII у пациентов с заболеваниями периферических арте- рий свидетельствуют о протромботическом статусе и выраженной эндоте- лиальной дисфункции.

Выводы. Для снижения неблагоприятного клинического течения ише- мии нижних конечностей и повышения первичной и вторичной прохо- димости реконструированных артерий необходимо определение групп повышенного риска сердечно-сосудистых осложнений. Выявленные гипер- коагуляционные изменения требуют индивидуального подхода к лечению с применением интенсивной и длительной антитромботической терапии.

Н.Е. Корсакова, Т.Н. Герт, В.В. Бураков, К.А. Комиссаров, В.Е. Солдатенков, О.А. Смирнова, О.Г. Головина, Н.Н. Силина, И.С. Мартынкевич

ГЕНЕТИКО-ГЕМОКОАГУЛЯЦИОННЫЕ ПАРАЛЛЕЛИ У БОЛЬНЫХ ХРОНИЧЕСКИМИ ЗАБОЛЕВАНИЯМИ ВЕН НИЖНИХ КОНЕЧНОСТЕЙ

Федеральное государственное бюджетное учреждение «Российский научно-исследовательский институт гематологии и трансфузиологии Федерального медико-биологического агентства», Санкт-Петербург

Введение. Одним из наиболее широко распространенных хронических заболеваний сосудов венозного русла является варикозное расширение вен нижних конечностей (ВРВНК). Данная патология приводит к снижению ка- чества жизни больных, в том числе молодого возраста, при прогрессирова- нии сопровождается развитием хронической венозной недостаточности и венозными тромбоэмболиями. Такие генетические факторы, как мутация FV Leiden (F5 1691 G/A), ассоциированы с повышенным риском тромбозов, при этом реализация тромботической предрасположенности определяется развитием протромботических изменений в системе гемостаза.

Целью исследования была оценка взаимосвязи генетических факторов риска тромбозов с коагуляционными показателями у больных ВРВНК.

Материалы и методы. Обследовано 34 пациента с ВРВНК, в том числе 12 мужчин и 22 женщины. Возраст больных находился в пределах от 34 до 71 лет, медиана – 57 лет. У 12 (35,3 %) пациентов имелись установленные тромботические осложнения в анамнезе: тромбозы глубоких и поверхностных вен, тромбоэмболии легочной артерии, варикотромбозы. Определение полиморфизма F5 1691 G/A проводили с помощью полимеразной цепной реакции в режиме реального времени в соответствии с инструкцией произ- водителя («РеалБест-Генетика Гемостаз», АО «Вектор-Бест»). Определение концентрации фибриногена, активности фактора VIII (фVIII), активности и уровня фактора Виллебранда (фВ), активности антитромбина (АТ), проте- ина С (PC), уровня свободного протеина S (PS), концентрации D-димера вы- полняли клоттинговыми, хромогенными и иммунотурбидиметрическими методами с использованием наборов HemosIL (Instrumentation Laboratory, США) согласно рекомендациям производителя. Статистическую обработку данных проводили при помощи программного пакета STATISTICA 10.0. Для представления непрерывных количественных данных использовали ме- диану и интерквартильный интервал, для сравнения 2-х групп применяли U-тест Манна-Уитни. Частоту встречаемости генотипов определяли пря- мым подсчетом, для оценки степени различий использовали двусторонний точный критерий Фишера. Различия считали статистически значимыми при p < 0,05.

Результаты. В обследованной группе мутация F5 1691 G/A выявлена в гетерозиготном состоянии у 3-х пациентов, все они имели тромботические проявления в анамнезе, представленные тромбозами глубоких и/или по- верхностных вен, тромбоэмболией легочной артерии. Частота встречаемо- сти мутации среди больных ВРВНК с тромбозами составила 25,0 % против 0,0 % в группе пациентов без тромботического анамнеза (p = 0,037). Группа пациентов с предшествующими тромбозами также характеризовалась не- которым усилением прокоагулянтных изменений относительно остальных больных ВРВНК: отмечено увеличение активности и уровня фВ, концентра- ции D-димера (129,8 (101,4–190,1) % против 118,1 (97,4–132,6) %, p = 0,327;

195,8 (121,9–208,0) % против 136,7 (117,3–149,9) %, p = 0,110 и 514,0 (363,5–894,5) нг/мл против 388,0 (237,5–545,0) нг/мл, p = 0,063 соответственно), снижение активности АТ и уровня свободного PS (87,0 (82,5–91,4) % против 91,8 (86,6–99,7) %, p = 0,080 и 87,9 (83,2–92,5) % против 97,7 (87,7–114,7) %, p = 0,102 соответственно).

Среди больных ВРВНК с тромбозами в анамнезе прокоагулянтные осо- бенности были наиболее выражены при наличии мутации F5 1691 G/A: активности фVIII и фВ значимо превышали показатели пациентов с нор- мальным генотипом (198,0 (180,5–209,5) % против 143,2 (102,1–157,7) %, p= 0,036 и 238,5 (209,8–251,2) % против 109,4 (98,7–131,4) %, p = 0,018 соответственно), увеличение уровня фВ несколько не достигало уровня стати- стической значимости (209,3 (206,9–216,9) % против 186,6 (112,3–200,4) %, p = 0,064).

Выводы. У больных ВРВНК прокоагулянтные изменения плазменно- го гемостаза, а именно, повышение активности фактора VIII, активности и уровня фактора Виллебранда, в значительной степени ассоциированы с наличием мутации F5 1691 G/A, определяя вклад данного фактора в риск развития тромботических осложнений.

Е.А. Кузьмина, Е.Ю. Челышева, Б.В. Бидерман, О.А. Шухов, Е.А. Степанова, А.Н. Петрова, И.С. Немченко, А.В. Быкова, М.А. Гурьянова, А.В. Кохно, А.Г. Туркина, А.Б. Судариков

 СОМАТИЧЕСКИЕ МУТАЦИИ ГЕНОВ, АССОЦИИРОВАННЫЕ  С МИЕЛОИДНЫМИ НЕОПЛАЗИЯМИ, У БОЛЬНЫХ ХРОНИЧЕСКИМ МИЕЛОЛЕЙКОЗОМ И ИХ КЛИНИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ

Федеральное государственное бюджетное учреждение «Национальный медицинский исследовательский центр гематологии» Министерства здравоохранения Российской Федерации, Москва

Введение. Роль соматических мутаций различных генов и их влияние на эффективность терапии ингибиторами тирозинкиназ (ИТК) у больных хроническим миелолейкозом (ХМЛ) активно изучается, поскольку пред- полагается, что соматические мутации могут быть одной из возможных причин резистентности к терапии ИТК.

Цель. С помощью метода высокопроизводительного секвенирования (ВПС) определить мутационный профиль у больных ХМЛ и оценить связь наличия соматических мутаций генов с ответом на терапию ИТК, общей выживаемостью (ОВ) и выживаемостью без прогрессирования (ВБП).

Материалы и методы. Исследование проводилось в двух группах боль- ных ХМЛ с разным ответом на терапию. Группа 1 (n=29): больные в хрони- ческой фазе (ХФ), n=18 и в фазе акселерации (ФА), n=6 с неудачей терапии ≥2 ИТК (за исключением непереносимости ИТК) по критериям ELN 2020 и больные с прогрессированием до бластного криза (БК) после терапии ≥1 ИТК, n=5. Группа 2 (n=29): больные со стабильным (≥1 года) глубоким молекулярным ответом (BCR::ABL1<0.01% IS). Проводилось исследование образцов ДНК, выделенной из крови, методом ВПС. В авторскую таргет- ную панель было включено 18 генов, ассоциированных с миелоидными неоплазиями (ASXL1, DNMT3A, FLT3, IDH1, IDH2, NPM1, RUNX1, SF3B1, SRSF2, TET2, TP53, U2AF2, KIT, WT1, CEBPA, ZRSR2, JAK2, GATA2), а также ген ABL1.

Всем больным в группе 1 (с неудачей терапии) впоследствии выполнялась смена лечения; 20/29 пациентам был назначен асциминиб. Медиана (Ме) наблюдения за больными после смены терапии составила 2,9 лет (диапа- зон 0,4-5).

Результаты. Частота выявления соматических мутаций генов была выше в группе 1 (больные с неудачей терапии), чем в группе 2 (больные с оптимальным ответом на терапию): 52% против 7% (р <0,05). В группе 1 у 15/29 (52%) больных выявлены мутации в следующих генах: ASXL1 – у 9 (31%) пациентов, DNMT3A – у 3 (10%), RUNX1, CEBPA – по 2 пациента (7%), WT1, NPM1, TET2 – по одному пациенту (3,5%). Частота мутаций не различалась в зависимости от фазы ХМЛ: мутации выявлены у 8 (44%)/18, 4 (67%)/6 и 3 (60%)/5 больных с ХФ, ФА и БК соответственно (р=0,06). У 11 (38%) пациентов выявлялись мутации гена ABL1. У 7 (24%) пациентов встречалось сочетание мутации ABL1 и мутации другого гена, наиболее ча- стое сочетание: ABL1 + ASXL1 – у 3/29 пациентов (10%). В группе 2 у 2/29 (7%) пациентов обнаружены мутации: DNMT3A, VAF 5% и TP53, VAF 9%.

Трехлетняя ОВ после смены терапии среди всех пациентов из группы 1 в ХФ/ФА (n=24, мутации у 12/24 больных) составила 48% у больных с му- тациями против 100% у больных без мутаций (р=0,01). Среди больных, пе- реведенных на терапию асциминибом, (n=20, мутации у 10/20 больных), 3-летняя ОВ значимо не различалась: 80% против 100% (р=0,06), однако 3-летняя ВБП при у больных с мутациями генов была ниже: 55% против 100% (р=0,024). У пациентов с мутациями отмечена меньшая вероятность достижения полного цитогенетического ответа (ПЦО) и большого моле- кулярного ответа (БМО) через 3 года терапии асциминибом: 20% против 70% (р=0,018) и 0% против 50% (р=0,004) соответственно.

Выводы. Соматические мутации генов, связанные с миелоидными нео- плазиями, чаще встречались у больных ХМЛ с неудачей терапии ИТК, чем у пациентов с оптимальным ответом на терапию. Наиболее часто выявля- лись мутации гена ASXL1 (31%). У пациентов с соматическими мутация- ми генов отмечена меньшая вероятность достижения ПЦО и БМО, а также снижение ВБП на фоне терапии асциминибом. Для оценки независимого влияния фактора наличия мутаций различных генов на эффективность терапии ИТК требуются дополнительные исследования на большей выборке пациентов.

Е.В. Кузьмич1, И.Е. Павлова1, А.А. Павлова1,2, Т.В. Глазанова1, Л.Н. Бубнова1

ГАПЛОТИПЫ ГЕНА IL-4 У БОЛЬНЫХ МНОЖЕСТВЕННОЙ МИЕЛОМОЙ С РАЗЛИЧНОЙ СТЕПЕНЬЮ ПОРАЖЕНИЯ КОСТНОЙ ТКАНИ

1Федеральное государственное бюджетное учреждение «Российский научно-исследовательский институт гематологии и трансфузиологии Федерального медико-биологического агентства», г. Санкт-Петербург 2Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования «Санкт-Петербургский государственный университет», г. Санкт-Петербург

 Введение. IL-4 участвует в регуляции процессов ремоделирования костной ткани. Антирезорбтивный эффект IL-4 проявляется в ингибиро- вании RANKL-зависимого и TNF-α-зависимого остеокластогенеза; инги- бировании эффекта IL-1, экспрессии c-Fos и NFATc1; снижении экспрессии RANKL; стимуляции образования остеопротегерина.

IL-4 способен индуцировать экспрессию TNF-α макрофагами посред- ством IL-6; увеличивать синтез IL-1, проявляя, таким образом, прорезорб- тивный эффект. Литическое поражение костей относится к характерным проявлениям множественной миеломы (ММ). Роль IL-4 в развитии данно- го осложнения недостаточно изучена.

Цель исследования: анализ гаплотипов гена IL-4 у больных множе- ственной миеломой с различной степенью поражения костной ткани.

Пациенты и методы. Обследованная группа включала 80 пациентов с ММ в возрасте 44-87 лет (медиана – 70 лет), 54 женщины и 26 мужчин. Пациенты были разделены на 2 группы в соответствии с системой ста- дирования Durie-Salmon: группа 1 – II стадия (n=42), группа 2 – III стадия (n=38). В составе контрольной группы (группа 3) 100 потенциальных до- норов костного мозга в возрасте 20-60 лет (медиана – 40 лет), 51 мужчина и 49 женщин. Однонуклеотидные полиморфизмы rs2243248 (-1098T/G), rs2243250 (-590C/T), rs2070874 (-33C/T) в гене IL4 исследовали с помо- щью набора Cytokine Genotyping Kit («Invitrogen», США). Для расчета частот аллелей и гаплотипов использовали программу Arlequin ver. 3.5, EM алго- ритм. Различия в частотах аллелей и гаплотипов гена IL4 между группами анализировали с помощью программы Статистика 10, χ2-теста, 2-сторон- него точного теста Фишера.

Результаты. Частоты аллелей гена IL4 не различались в общей группе пациентов (n=80) и в контрольной группе. Установлено достоверное повышение частоты гаплотипа -1098T -590C -33T (гаплотип TCT) в общей группе пациентов по сравнению с контрольной группой (0,1486 против 0,0535; χ2 9,140; p=0,003). В таблице 1 представлены результаты анализа частот гаплотипов гена IL-4 в группах пациентов с разной степенью пора- жения костной ткани и группе контроля.

У пациентов с тяжелыми остеолитическими поражениями (группа 2) наблюдалось увеличение частоты гаплотипа TCT по сравнению с кон- трольной группой (χ2 7,633; p=0,006). У пациентов с проявлениями остео- пороза и единичными очагами лизиса в костях (группа 1) также отмечено увеличение частоты гаплотипа TCT по сравнению с контрольной группой (χ2 6,135; p=0,01). Сравнение частоты гаплотипа TCT между группами 1 и 2 не выявило значимых различий (χ2 0,71; p=0,79). Среди пациентов с гапло- типом TCT наиболее часто встречался генотип TCT/TTT (11 пациентов). Генотип TCT/TCC был выявлен у 8 пациентов; генотип TCT/GTT был опре- делен у 1 пациента. Генотип TCT/TCT был выявлен у 2 пациентов. Гапло- тип TCT и наиболее распространенный в контрольной группе гаплотип TCC различаются в положении -33, расположенном в 5' нетранслируемой области. Замена цитозина на тимин в положении -33 оказывает влияние на продукцию IL-4.

Заключение. Результаты исследования свидетельствуют о повышен- ной частоте гаплотипа -1098T -590C -33T гена IL-4 у пациентов с множе- ственной миеломой независимо от степени поражения костной ткани.

 Д.В. Кустова1, А.Н. Кириенко1, Е.В. Мотыко1, Е.В. Ефремова1, В.А. Шуваев2,3, И.С. Мартынкевич1

NGS ИССЛЕДОВАНИЕ ПАЦИЕНТОВ С СОЧЕТАНИЕМ ХМЛ И МУТАЦИЯХ В ГЕНАХ JAK2 И CALR

1Российский научно-исследовательский институт гематологии и трансфузиологии Федерального медико-биологического агентства, Санкт-Петербург

2Российская медицинская академия последипломного образования, Москва

3Медицинский радиологический научный центр им. А.Ф. Цыбы, Обнинск

Введение. Наличие филадельфийской хромосомы (Ph) и драйверных мутаций Ph-негативных МПН считаются взаимоисключающими, однако в литературе появляется все больше доказательств того, что эти два собы- тия могут происходить одновременно.

Цель. Используя таргетное высокопроизводительное секвенирование (NGS) изучить молекулярно-генетический ландшафт пациентов с сочета- нием ХМЛ и Ph-негативными МПН, а также оценить особенностей течения заболевания.

Материалы и методы. В исследование включены образцы ДНК из кле- ток периферической крови 336 пациентов (152 женщины и 184 мужчины) в возрасте от 19 до 90 лет (Me=57). Молекулярно-генетический анализ включал: цитогенетический анализ, анализ мутаций в генах JAK2, CALR и MPL, а также NGS-исследование для пациентов с выявленными драйвер- ными мутациями.

Результаты. Филадельфийская хромосома обнаружена у 100% пациен- тов. Драйверные мутации Ph-негативного МПН выявлены у 1,8% пациен- тов (6/336). Мутация V617F в гене JAK2 обнаружена у 1,2% (4/336) паци- ентов. Инсерция 5 нуклеотидов в 9-й экзоне гена CALR выявлена у 0,3% (1/336) пациентов, а делеция 52 нуклеотидов в гене CALR – у 0,3% пациен- тов (1/336). Мутации в гене MPL обнаружены не были.

NGS исследование позволило выявить две патогенные мутации в генах BCOR (W1051*) и ABL (M244V), в дополнение к делеции 52 нуклеотидов в гене CALR у одного пациента. Согласно литературным данным, мутации в гене BCOR являются редким событием в хронической фазе ХМЛ и, если присутствуют, обычно сохраняются, несмотря на снижение транскрипта BCR::ABL под действием ингибиторов тирозинкиназы (ИТК). Таким обра- зом, мутации в гене BCOR предположительно находятся в Ph-негативном клоне. Мутации BCOR встречаются примерно у 16% пациентов с бластным кризом и способствуют трансформации ХМЛ. Сравнивая аллельную нагрузку выявленных мутаций у этого пациента, можно предположить, что мутации в гене BCOR (8,16%) и CALR (3,58%) несет один Ph-негативный клон, тогда как Ph-положительный клон содержит мутацию в гене ABL с аллельной нагрузкой 35%. Несмотря на 4 линии терапии, включая тера- пию асциминибом, заболевание достаточно быстро перешло из хрониче- ской фазы в фазу акселерации, а затем в бластный криз.

Мутации неясной клинической значимости были выявлены у 100% пациентов (6/6) в генах CUX1 (33,3%), KDR (16,7%), FAT1 (16,7%), BRCA1 (16,7%), PTCH1 (16,7%), APC (16,7%), KLF2 (16,7%), BCORL1 (16,7%), KMT2C (16,7%), SH2B3 (16,7%). У двух пациентов обнаружена одна и та же мутация — замена треонина на метионин в позиции 1384 гена CUX1. Этот вариант не описан в литературе при ХМЛ, однако мутации в гене CUX1 встречаются у пациентов с Ph-негативным МПН. Все перечисленные гены участвуют в регуляции клеточных процессов, таких как пролиферация, дифференцировка, апоптоз и сигнальная трансдукция. Гены KDR, PTCH1, APC и KLF2 связаны с сигнальными путями VEGF, HEDGEHOG, WNT, которые регулируют клеточные процессы. Мутации в данных генах могут давать клетке с драйверной мутацией преимущество в дифференцировке и про- лиферации.

Пациенты с сочетанием двух заболеваний (Me=23) лучше достига- ют большого молекулярного ответа (БМО) по сравнению с пациентами с BCR::ABL-независимой резистентностью к ИТК (Ме=43) (р=0,0072). Од- нако все пациенты с сочетанием двух заболеваний были резистентны к иматинибу, поскольку он действует только на BCR::ABL -тирозинкиназу, тогда как ингибиторы следующих поколений являются мультикиназными ингибиторами. При терапии последующими поколениями ИТК БМО был достигнут у 83,3% (5/6) пациентов, тем не менее при снижении относи- тельной экспрессии гена BCR::ABL у 50% (2/4) увеличилась аллельная на- грузка мутации V617F гена JAK2, что предположительно свидетельствует о существовании двух различных клонов или субклонов.

Выводы. Молекулярные механизмы, приводящие к появлению допол- нительных клонов у пациентов с ХМЛ, остаются неясными. NGS исследо- вание способствует не только выявлению дополнительных молекулярных событий, но и пониманию молекулярных механизмов клональной эволю- ции и появлению дополнительных клонов, а также позволяет выявить ранее не описанные маркеры и новые клональные процессы, требующие дополнительных исследований.

 Д.В. Ласточкина1, А.В. Виноградов2,3

ОРГАНИЗАЦИЯ МАРШРУТИЗАЦИИ ДЛЯ ПРОВЕДЕНИЯ ГЕНЕТИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ У ПАЦИЕНТОВ ОНКОГЕМАТОЛОГИЧЕСКОГО ПРОФИЛЯ. ОПЫТ СВЕРДЛОВСКОЙ ОБЛАСТИ

1ФГБУ «Российский научно-исследовательский институт гематологии и трансфузиологии Федерального медико-биологического агентства», Санкт-Петербург

2ФГБОУ ВО «Уральский государственный медицинский университет» МЗ РФ, Екатеринбург

3ГАУЗ СО «Свердловская областная клиническая больница №1», Екатеринбург

Введение. Выбор наиболее оптимальной стратегии по организации ди- агностики, терапии и мониторинга состояния пациентов с онкогематологи- ческими заболеваниями является важным элементом повышения эффек- тивности оказания медицинской помощи. Внедрение изменений повышает доступность специализированных технологий, в которых нуждается паци- ент гематологического профиля не только на этапе постановки диагноза, но и дальнейшего наблюдения и лечения.

Цель. Проанализировать мероприятия по оптимизации маршрутизации, диагностики и лечению больных онкогематологического профиля в Сверд- ловской области, реализуемых в рамках национальной программы «Борьба с онкологическими заболеваниями».

Материалы и методы. Проанализированы нормативные правовые акты Министерства здравоохранения Свердловской области, регламентирующие маршрутизацию пациентов для выполнения диагностических исследова- ний, лабораторных тестов и проведения химиотерапии за 2022 – 2024 гг.

Результаты. В период 2022 – 2024 гг. на территории Свердловской обла- сти нормативное регулирование организации специализированной меди- цинской помощи больным онкогематологического профиля определялось приказами Минздрава Свердловской области от 21.08.2023 №1955-п «О временной маршрутизации биологических материалов от взрослых боль- ных онкогематологического профиля для генетических исследований» и от 02.01.2022 №2-п «Об организации проведения химиотерапевтического лечения больных онкогематологическими заболеваниями». В их основе лежит территориальное распределение потоков пациентов для проведе- ния обследования и химиотерапевтического лечения. Утверждены перечни медицинских организаций, осуществляющих деятельность по проведению химиотерапии онкогематологических заболеваний как в условиях круглосуточного, так и дневного стационаров, диагностические манипуляции и операции. В части, касающейся выполнения генетических исследований также внедрены перечни услуг, позволяющие осуществлять молекуляр- но-генетическую диагностику пациентов как на этапе постановки диагноза, так и на этапе мониторинга эффективности проводимого лечения и по его завершении за счет средств Территориальной программы обязательного медицинского страхования. Выполнение молекулярно-генетических иссле- дований централизовано в медицинских организациях 3 уровня, обладаю- щих достаточной технической и кадровой оснащенностью для проведения высокоспециализированных тестов, при этом направление материала мо- гут осуществлять медицинские организации 1-3 уровней. В результате, го- довой объем предоставления указанных лабораторных тестов в 2024 году составил 5452 единиц.

Выводы. Внедренная система организации маршрутизации обеспечи- вает доступность оказания специализированной медицинской помощи для пациентов с онкогематологическими заболеваниями с учетом региональ- ных особенностей размещения медицинской инфраструктуры. Несмотря на то, что система является централизованной, она улучшает возможности об- следования больных гемобластозами как на этапе диагностики, так и дис- пансерного наблюдения на территории Свердловской области.

Д.В. Ласточкина, А.Д. Касьянов, И.С. Голованова, Г.В. Гришина

ОСОБЕННОСТИ СОДЕРЖАНИЯ ТРОМБОЦИТАРНЫХ  МИКРОЧАСТИЦ В ЗАВИСИМОСТИ ОТ ГРУППОВОЙ ПРИНАДЛЕЖНОСТИ ПО СИСТЕМЕ АВ0

Федеральной государственное бюджетное учреждение «Российский научно-исследовательский институт гематологии и трансфузиологии Федерального медико-биологического агентства», Санкт-Петербург

Введение. Среди всех типов микрочастиц, содержащихся в крови челове- ка, тромбоцитарные микрочастицы (ТМЧ) являются наиболее распростра- ненными. ТМЧ участвуют во многих биологических процессах, таких как прокоагулянтная активность, восстановление эндотелия, ангиогенез, вос- паление, модуляция межклеточных коммуникаций. Клиническую важность микрочастицы имеют в трансфузионной медицине, так как они обуслав- ливают активацию клеток в концентрате тромбоцитов (КТ). Показано, что повышенное количество ТМЧ в компонентах крови может быть причиной осложнений у реципиентов за счет модуляции функции иммунных клеток.

С учетом потенциальных эффектов ТМЧ на реципиента при трансфузиях КТ немаловажное значение имеют характеристики донора.

Цель. Оценка связи групповой принадлежности донора по системе АВ0 и количества ТМЧ в концентрате тромбоцитов.

Материалы и методы. Исследовано 79 образцов концентратов тромбо- цитов, заготовленных методом автоматического афереза. Полученные ком- поненты были получены от доноров, у которых анализировались следую- щие характеристики: пол, стаж, возраст, группа крови по системе АВ0. В КТ оценивали число тромбоцитов на гематологическом анализаторе и уровень тромбоцитарных микрочастиц методом проточной цитометрии. Результа- ты исследования представлены в виде среднего значения. Оценка различий между группами проводилась с использованием однофакторного дисперси- онного анализа ANOVA. Статистически значимые различия определялись при p < 0,05.

Результаты. Распределение доноров по группам крови было следующим: в I группу вошло 33 донора (41,8%), во II включено 25 доноров (31,6%), в III группе было 11 доноров (13,96%), в IV – 10 доноров (12,7%). Возраст в иссле- дуемых группах находился в одном диапазоне, составив 39 лет для I группы, 37 лет для II группы, 41 год для III группы и 42 года – для IV. Донорский стаж, исчисляемый медианным значением количества донаций, значитель- но больше был у доноров с I группой по АВ0 – 16 донаций, 9 донаций было у лиц со II группой, для доноров с III группой медиана стажа составила 8, для доноров с IV – 3. Данные различия могут быть связаны с более высокой распространенностью и, соответственно, потребностью в КТ определенных групп крови.

Определена связь группы крови по системе АВ0 на число тромбоцитов в 1-е сутки хранения тромбоконцентрата (р=0,035). В среднем у доноров с I группой было 960 тыс/мкл (95%ДИ 855–1065) тромбоцитов, у доно- ров со II группой 1124 тыс/мкл (95%ДИ 1002–1247), с III группой 858 тыс/ мкл (95%ДИ 763–953), IV – 1127 тыс/мкл (95%ДИ 852–1402). На 5-е сутки уровень тромбоцитов значимо не отличался среди групп доноров (p>0,05). Содержание ТМЧ в КТ как в день заготовки, так и в конце срока годности не зависело от групповой принадлежности донора (p>0,05). В день получе- ния тромбоконцентрата уровень ТМЧ для I группы составил 13607 (95%ДИ 8666-18548), для II группы 11793 (95%ДИ 6469-17116), для III группы 12743 (95%ДИ 6868-18619), для IV – 12422 (95%ДИ 8643-16200). К Концу срока хранения содержание ТМЧ увеличилось у лиц с I группой до 44435 (95%ДИ 36084-52785), со II группой до 39423 (95%ДИ 32470-46376), для доноров с III группой 40075 (95%ДИ 21434-58716), а для доноров с IV группой – 39317 (95%ДИ 30874-47761). Прирост микрочастиц у доноров I и II группы был незначительно выше, составив 583% и 550%, тогда как среди доноров с III и IV группой по АВ0 несколько ниже – 433% и 394% соответственно.

Выводы. В целом полученные результаты свидетельствуют об отсут- ствии влияния групповой принадлежности по системе АВ0 на содержание тромбоцитарных микрочастиц, за исключением показателя числа тромбо- цитов в день заготовки КТ. Среди всех исследуемых групп доноров наблю- дался сопоставимый прирост уровня ТМЧ к концу срока годности тромбо- цитного концентрата.

М.М. Махмудова, М.У. Джумабева, Ж.Ф. Гулмирзаев, А.А. Яриев

АНАЛИЗ АССОЦИАЦИИ ПОЛИМОРФИЗМОВ Pro47Ser И Pro72Arg ГЕНА TP53 С РИСКОМ РАЗВИТИЯ ХРОНИЧЕСКОГО МИЕЛОИДНОГО ЛЕЙКОЗА В УЗБЕКИСТАНЕ

Республиканский научно-практический медицинский центр гематологии, Ташкент, республика Узбекистан

Введение. Последние годы в мировой литературе опубликован ряд работ, в которых изучали роль гена TP53 в развитии риска развития коло- ниальных опухолевых клеток. Учитывая значимую роль полиморфизма этих генов в развитие опухолевых клеток, нами был проведен анализ ча- стоты распределения аллельных и генотипических вариантов Pro47Ser и Pro72Arg гена TP53 в когорте пациентов с хронимческим миелоидным лей- козом (ХМЛ).

Цель. Оценить роль полиморфизмов Pro47Ser и Pro72Arg гена TP53 в па- тогенезе ХМЛ.

Материалы и методы. В исследование были включены 142 больных с клинически, цитогенетически и молекулярно-генетически подтвержден- ным диагнозом ХМЛ. В качестве контроля использовали образцы геномной ДНК 105 условно здоровых доноров. ПЦР анализ полиморфизмов Pro47Ser Pro72Arg гена TP53 проводили с применением коммерческих наборов ООО НПФ Литех (Россия) и Синтол (Россия). Амплификацию проводили с исполь- зованием приборов RotorGeneQ (Quagen, Германия). Статистический анализ результатов проведен с использованием пакета программ «OpenEpi, Version 9.2».

Результаты. Следует отметить, что частота полиморфизма Pro47Ser гена TP53 среди больных и контроля была очень низкая -0,8% против 0,0%, со- ответственно (р>0,05). Генотипические варианты Pro/Pro, Pro/Arg и Arg/

Arg полиморфизма Pro72Arg гена TP53 в группе больных и выборке контро- ля значилась: 16,9%, 44,4% и 38,7% против 10,5%, 39,0% и 50,5%, соответ- ственно. Установлено, что носительство неблагоприятного генотипа Pro/ Pro увеличивало шанс развития ХМЛ в 1,7 раз (OR=1.7; χ2=2.0 р=0.02). Сле- дует отметить, что для данного локуса распределение частот генотипов в исследованных выборках больных и контроля соответствовало ожидаемо- му при равновесии Харди – Вайнберга.

Выводы. Полиморфизм Pro72Arg гена TP53 играет самостоятельной роль в патогенезе ХМЛ и является значимым прогностическим маркером для прогнозирования развития данной патологии.

В.А. Мисюрин1,2, А.В. Южакова1,3, А.Н. Копылов1,4

ПРИМЕНЕНИЕ МЕТОДОВ МАШИННОГО ОБУЧЕНИЯ ДЛЯ АНАЛИЗА РЕЗУЛЬТАТОВ ИММУНОФЕНОТИПИРОВАНИЯ КОСТНОГО МОЗГА БОЛЬНЫХ МНОЖЕСТВЕННОЙ МИЕЛОМОЙ

1КДЦ ООО «ГеноТехнология», Москва, Россия

2Каролинский институт, Стокгольм, Швеция

3Государственное бюджетное учреждение здравоохранения города Москвы

«Морозовская детская городская клиническая больница Департамента здравоохранения города Москвы, Москва, Россия

4Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования «Национальный исследовательский ядерный университет

«МИФИ»», Москва, Россия

Введение. Рутинная диагностика множественной миеломы (ММ) ме- тодом проточной цитометрии является важным этапом в онкогематоло- гической практике. Однако выделение немногочисленных событий, со- ответствующих злокачественным клеткам, в некоторых случаях остаётся сложной задачей. В последние годы для анализа данных применяют методы машинного обучения. Характер данных проточной цитометрии (ПЦ) позво- ляет использовать методы снижения размерности, что позволяет отобра- зить события, исходно проанализированные в четырёх и большим коли- честве флуоресцентных каналах, на двумерной плоскости. Таким образом, имея результаты ПЦ, можно отобразить их не в виде ряда скейтерограмм, показывающих экспрессию двух выбранных антигенов с отображением экс- прессии других антигенов в виде псевдоцветов, а создать единый двухмер- ный чарт для всех событий, в котором будет учтены особенности экспрес- сии сразу всех проанализированных антигенов. Особенно важно то, что на данном чарте все события будут собраны в отдельные кластеры, соответ- ствующие гранулоцитам, лимфоцитам, и, при наличии, кластер клеток ММ. Для решения подобной задачи подходит алгоритм UMAP, который может

«запомнить» топологические свойства тренировочных данных и обеспечи- вает трансформацию новых данных.

Цель. Разработать и валидировать метод анализа данных ПЦ на основе UMAP для автоматического выделения и определения популяции клеток ММ в костном мозге, с акцентом на воспроизводимость метода для приме- нения в клинической диагностике.

Материалы и методы. В исследовании использовались 38 образцов костного мозга: 12 образцов с доказанным наличием популяции клеток ММ и 26 – без таковых, окрашенных антителами к антигенам CD45, CD138, CD38, CD56, CD19, CD79a, CD117, CD10, κ, λ, CD3 и Ki-67. Анализ данных осущест- влялся с использованием алгоритма UMAP. Основные этапы включали: (1) сбор данных проточной цитометрии, (2) нормализация и очистка данных от выбросов, (3) обучение UMAP-классификатора на языке python с последую- щим сохранением, и (4) переиспользование классификатора для новых дан- ных. Полученный классификатор применялся к новым образцам, которые проходили ту же трансформацию, что и данные обучающей выборки. При наличии клеток ММ в тестовом образце, их проекция на UMAP-диаграмме совпадала с областью, где располагались злокачественные клетки в обуча- ющем наборе.

Результаты. Применение описанного метода позволило добиться опре- деления клеток ММ в образцах костного мозга. На UMAP-диаграмме тесто- вые образцы, содержащие злокачественные клетки, отображались в обла- сти, совпадающей с кластером, сформированным в обучающей выборке. События, соответствующие погибшим клеткам, либо клеточным агрегатам, которые мешают выполнению рутинного анализа, были организованы в независимый кластер, и не мешали посчитать количество клеток ММ. Та- ким образом, что алгоритм успешно выделяет редкие события, соответству- ющие клеткам ММ, создавая отдельный кластер, и решает проблему «засо- рения» образца нежелательными событиями, что значительно повышает точность диагностики.

Выводы. Разработанный подход на базе UMAP-классификатора демон- стрирует высокую эффективность в автоматизации определения клеток ММ. Преимущества метода заключаются в его воспроизводимости и воз- можности применения обученной модели для трансформации новых дан- ных, что существенно упрощает процесс рутинной диагностики.

М.А. Михалева, Е.В. Мотыко, И.С. Мартынкевич, О.Б. Крысюк, А.Ю. Кувшинов, С.В. Сидоркевич

МИЕЛОИДНЫЙ КЛОНАЛЬНЫЙ ГЕМОПОЭЗ НЕОПРЕДЕЛЕННОГО ПОТЕНЦИАЛА У ПАЦИЕНТОВ  С ХРОНИЧЕСКИМ ЛИМФОЦИТАРНЫМ ЛЕЙКОЗОМ

ФГБУ «Российский научно-исследовательский институт гематологии и трансфузиологии ФМБА России», Санкт-Петербург

Введение. Мутации в генах миелоидного клонального гемопоэза не- определенного потенциала (myeloid clonal hematopoiesis of indeterminate significance, M-CHIP) достоверно ассоциированы с развитием миелоидных неоплазий, но недостаточно описаны у пациентов с хроническим лимфоци- тарным лейкозом (ХЛЛ). Развитие M-CHIP нередко связывают с воздействи- ем экотоксикантов, в частности ионизирующего излучения.

Цель. Оценка частоты мутаций в генах-драйверах M-CHIP и их влияния на время до начала первой линии терапии (ВТ1) и общую выживаемость (ОВ) среди пациентов с ХЛЛ.

Материалы и методы. В ретроспективное исследование включено 50 нелеченых пациентов с ХЛЛ которым таргетное секвенирование нового поколения (next-generation sequencing, NGS) выполнено до первой линии терапии. ХЛЛ диагностирован согласно критериям iwCLL (2018). Медиа- на времени от верификации диагноза до выполнения NGS составила 1,7 лет (0–12,1). Медиана возраста на момент верификации диагноза – 61 год (26–82), гендерное разделение – 35 мужчин (70%) и 15 женщин (30%). Ме- диана времени наблюдения за когортой с момента верификации диагноза составила 5,8 лет (диапазон 1 мес–15,7 лет). Медиана времени наблюде- ния за когортой с момента выполнения NGS составила 3,1 года (1 мес –5,2 лет). Мутационный скрининг выполнен таргетной NGS панелью (NextSeq, Illumina) охватывающей все экзоны или горячие точки 118 генов методом парно-концевого прочтения. В анализ включены соматические вариан- ты в генах (n=38), отобранных согласно строгим критериям (≥1 соматиче- ской мутации в генах M-CHIP с частотой вариантного аллеля (variant allele frequency, VAF) ≥2%) ранее опубликованными A. Niroula (Nat Med, 2021) и A. Vijenthira (Blood Adv, 2024). Наличие мутаций M-CHIP проанализировано как бинарный и категориальный (≥2 vs 1 vs 0 мутаций) предикторы. Стандарт- ные протоколы использованы для определения мутационного статуса IGHV, хромосомных аберраций FISH-анализом (11q, 13q, 17p и трисомия 12) и сти- мулированного кариотипа. Оценка совместного возникновения и взаимной исключительности (COME) мутаций в генах и клинико-биологических пара- метров ХЛЛ выполнена у пациентов с высокой мутационной нагрузкой (≥2 мутаций разных генах). ВТ1 определено от даты диагноза до начала лече- ния. ОВ рассчитана от даты NGS до последнего контакта с пациентом.

Результаты. У 70% пациентов ХЛЛ (95%ДИ: 56,8–83,2; n=35) выявлены мутации в 74% (28/38) генах-кандидатов M-CHIP, что значительно чаще, чем в общей популяции – 5,8% (p<0,0001). У большинства пациентов (63%) выявлено ≥2 M-CHIP мутаций. Наиболее часто отмечались мутации в генах KIT – 23%, EZH2 – 20%, EP300 и GNAS – по 17% каждый. Медиана VAF круп- нейшего клона составила 51,3% (36,1–86,8). Уровень VAF ≥10% выявлен у 91% пациентов. Наличие del(17p) ассоциировано с мутированным геном STAG2 (13,3%, p=0,04); del(11q) с наличием мутаций в генах M-CHIP в целом (p=0,021) и с мутированным RUNX1 (p=0,008) в частности. Высокий уровень экспрессии маркера CD38+ (>20%) чаще определялся у больных с мутация- ми в гене NF1 (13,3%, p=0,035). При наличии мутаций в генах IDH1 (22,2%, p=0,04), MPL (33,3%, p=0,005), RAD21 (22,2%, p=0,04) и SETBP1 (22,2%, p=0,004) достоверно чаще выявлялся мутированный IGHV. Иных ассоциаций M-CHIP с клинико-биологическими параметрами ХЛЛ не выявлено. Среди 63% пациентов со множественными мутациями (≥2) в генах M-CHIP оцене- но COME. После контроля на множественные сравнения значимое со-воз- никновение было выявлено между IDH1 : RAD21 (p=3,65E-05) и MAP2K1 : STAG2 (p=0,0002). M-CHIP как бинарный предиктор не оказывал значимого влияния на ВТ1 (HR 1,87; 95%ДИ: 0,9–3,7; p=0,07). M-CHIP ≥2 являлся пре- диктором укорочения ВТ1 (HR 2,1; 95%ДИ 1–4,4; p=0,049). Однако сокра- щение ВТ1 было наиболее значимым при наличии 4 мутаций M-CHIP (HR 6,46; 95%ДИ: 1,9–21,9; p=0,003). Пятилетняя-ОВ составила 93,3% (95%ДИ: 81,5–100) для пациентов без M-CHIP мутаций в сравнении с 79,4% (95%ДИ: 54,8–100) для пациентов с ≥2 M-CHIP мутациями. У пациентов с ≥2 M-CHIP мутациями против 1 мутации, выявлено значимое сокращение 5-летней ОВ (85,9% vs. 100%, p=0,04).

Выводы. Выявлена высокая частота M-CHIP мутаций у пациентов с ХЛЛ. Кастомная NGS панель позволила выявить мутации в 74% генах M-CHIP. Па- циенты остаются под активным наблюдением для оценки ассоциации нали- чия M-CHIP с риском развития миелоидных неоплазий, в том числе лучевого воздействия. 

Е.В. Мотыко, А.Н. Кириенко, Д.В. Кустова, Т.Н. Герт, И.В. Леппянен, Д.В. Моторин, С.В. Сидоркевич, И.С. Мартынкевич

МУТАЦИОННЫЙ ЛАНДШАФТ И ЕГО ВЛИЯНИЕ НА ПРОГНОЗ У БОЛЬНЫХ ОСТРЫМИ МИЕЛОИДНЫМИ ЛЕЙКОЗАМИ ИЗ ГРУППЫ БЛАГОПРИЯТНОГО РИСКА

ФГБУ «Российский научно-исследовательский институт гематологии и трансфузиологии ФМБА», Санкт-Петербург

Введение. Острые миелоидные лейкозы (ОМЛ) с участием основного связывающего фактора (CBF) и с мутациями в гене нуклеофосмина (NPM1) составляют отдельную крупную группу ОМЛ и несмотря на принадлежность по классификациям к группе благоприятного прогноза имеют гетерогенное течение и примерно у 40% таких пациентов наблюдается рецидив. Факто- ры, способствующие развитию рецидивов, до сих пор до конца не изучены.

Цель. Оценить геномную гетерогенность ОМЛ с использованием метода секвенирования нового поколения (NGS) и проанализировать влияние наи- более часто встречающихся аберраций на прогноз.

Материалы и методы. В исследование были включены 40 больных ОМЛ с мутациями в гене NPM1, 25 пациентов с t(8;21) и 21 с inv(16). Образцы были проанализированы с помощью морфологических, цитогенетических методов, ПЦР и NGS на приборе MiSeq (Illumina) с использованием таргет- ной панели из 118 генов.

Результаты. Большинство пациентов с t(8;21) (74%) имели дополни- тельные хромосомные аберрации (в основном -X/-Y), и только 33% паци- ентов с inv(16) имели дополнительные хромосомные аберрации (p=0,01). У 96% пациентов с CBF-ОМЛ была выявлена как минимум 1 мутация. Наиболь- шую частоту встречаемости в обеих группах имели мутации в NRAS, KRAS, KIT. Пациенты с t(8;21) имели значительно больше мутаций, чем с inv(16) (p=0,03). Прогностически неблагоприятные мутации в генах модификато- рах хроматина были выявлены только при t(8;21) ОМЛ. Наблюдалась тен- денция к ухудшению безрецидивной выживаемости (БРВ) у пациентов с t(8;21) по сравнению с пациентами с inv(16) (p=0,072). Было установлено, что мутации в генах, участвующих в активации сигнальных путей, негатив- но влияют на БРВ пациентов с CBF-ОМЛ (p=0,04).

В группе NPM1+ОМЛ 100% пациентов имели хотя бы одну мутацию, в среднем 5 мутаций на пациента (1-9). У пациентов с мутациями FLT3-ITD 5-летняя общая выживаемость (ОВ) составила 34%, по сравнению с паци- ентами без FLT3-ITD – 55% (p=0,001). В группе из 29 пациентов без FLT3-ITD у 14 больных (48,3%) после консолидирующей химиотерапии развился ре- цидив. Мы сравнили мутации при диагностике и рецидиве у 10 пациентов – только у 2 пациентов мутации были идентичными в дебюте и рецидиве. Мутации в FLT3 и IDH1/2 были как приобретенными, так и утраченными при рецидиве. Мутации в NRAS чаще терялись при рецидиве. Различные цитогенетические аномалии были приобретены при рецидиве (4/10, 40%). Среднее количество мутаций при диагностике в группе с рецидивом соста- вило 5,5, по сравнению с 3,9 у пациентов без рецидива (p = 0,041). У пациен- тов с сочетанием мутаций NPM1/DNMT3A/IDH1/2 наблюдалась тенденция к снижению ОВ (p=0,09).

Выводы. ОМЛ из группы благоприятного прогноза представляют собой большую генетическую подгруппу ОМЛ и имеют высоко гетерогенный мо- лекулярно-генетический профиль. Наиболее частыми молекулярными со- бытиями в этой группе больных ОМЛ являются мутации в генах, активиру- ющих внутриклеточные сигнальные пути. Наличие в двух группах CBF-ОМЛ –с t(8;21) и inv(16) своих характерных генетических особенностей делает целесообразным проводить их анализ отдельно. Мутации в гене KIT также как и другие мутации генов, участвующих в активации сигнальных путей негативно влияют на безрецидивную выживаемость пациентов с CBF-ОМЛ. Высокая аллельная нагрузка мутаций в гене NPM1 в дебюте заболевания, наличие более 2-х дополнительных мутаций, мутаций, ассоциированных с миелодисплазией, мутаций FLT3-ITD и FLT3-ITD/DNMT3A значительно сни- жают ОВ больных NPM1+ОМЛ. В группе FLT3-ITD-/NPM1+ОМЛ высокая му- тационная нагрузка, лейкоцитоз и комбинация NPM1+/DNMT3A+/IDH1/2+ негативно влияют на выживаемость пациентов. Использование новейших молекулярно-генетических технологий, таких как метод высокопроизво- дительного секвенирования, дает возможность получить развернутую ха- рактеристику мутационного профиля для каждого больного, что является критически важным для больных ОМЛ из группы благоприятного прогноза, с учетом высокой частоты встречаемости у них мутаций и появления эф- фективной таргетной терапии.

Е.Л. Назарова, Е.В. Трегубова, Е.С. Осипова

СУРРОГАТНЫЕ МАРКЕРЫ МУТИРОВАННЫХ ГЕНОВ ВАРИАБЕЛЬНЫХ УЧАСТКОВ ТЯЖЕЛЫХ ЦЕПЕЙ ИММУНОГЛОБУЛИНОВ ПРИ ХРОНИЧЕСКОМ ЛИМФОЛЕЙКОЗЕ

Федеральное государственное бюджетное учреждение науки

«Кировский научно-исследовательский институт гематологии и переливания крови ФМБА России», г. Киров

Введение. Определение мутационного статуса генов вариабельного региона иммуноглобулинов (IGHV) – трудоемкая, дорогостоящая методи- ка, редко используемая в рутинной лабораторной практике. В Российской Федерации, в соответствии с клиническими рекомендациями при В-клеточ- ном хроническом лимфоцитарном лейкозе (ХЛЛ), исследование генов IGHV не является обязательным и чаще проводится при развернутых стадиях заболевания. Предложены несколько показателей, отражающих наличие/ отсутствие IGHV-мутаций при ХЛЛ: экспрессия CD38 и ZAP-70 на лимфоид- ных клетках больных, мутации генов LPL, DMD, ZNF288 и ZAP-70, однако они не являются надежными суррогатными маркерами мутированного вари- анта заболевания (M-ХЛЛ) и могут не совпадать в 5-23% случаев. Немути- рованный вариант (Н-ХЛЛ) заболевания характеризуется агрессивным, хи- миорезистентным течением, высокой частотой выявления прогностически неблагоприятных цитогенетических маркеров, низкими показателями бес- событийной и общей выживаемости.

Цель. Выявить дополнительные суррогатные маркеры мутационного статуса генов вариабельных участков тяжелых цепей иммуноглобулинов при В-клеточном хроническом лимфоцитарном лейкозе.

Материалы и методы. Материалом для исследования служила геном- ная ДНК, выделенная из мононуклеаров периферической крови 46 больных ХЛЛ. Полиморфизм генов IL4-590C>T и TLR9-1237T>C, TNFα-308G>A опре- деляли методом ПЦР с аллель-специфичными праймерами. Для выявления клональной IGHV перестройки ДНК пациентов амплифицировали в 6 от- дельных реакциях с использованием лидерных праймеров, специфичных к VH семействам, и консенсусного праймера JH. Если с этим набором кло- нальность установить не удавалось, использовались праймеры, рекомендо- ванные BIOMED-2. ПЦР продукт секвенировали с использованием генети- ческого анализатора ABI PRISM 3500XL (Applied Biosystems). Полученные последовательности сравнивали с имеющимися в базе данных IMGT/V-QUEST (https://www.imgt.org/IMGT_vquest/input). Анализ последовательно- сти VH гена оценивали в соответствии с рекомендациями, предложенными ERIC (European Research Initiative on CLL). Для определения прогностической значимости полиморфных генетических маркеров использовали многофак- торную логистическую регрессию. Статистически значимыми считали зна- чения при p<0,05.

Результаты. На основании стандартного порога 98,0 % идентичности герминальной последовательности наиболее близкого IGHV-гена выделены 2 группы пациентов: с немутированным (Н-ХЛЛ, 37; 80,4%) и с мутирован- ным (M-ХЛЛ, 9; 19,6%) вариантами строения BCR-региона. Информация об экспрессии CD38 получена от 28/37 (75,7%) больных Н-ХЛЛ и от 7/9 (77,8%) пациентов с M-ХЛЛ. Из них при Н-ХЛЛ у 3 (10,7%) CD38 экспрессировался более чем на 30,0% опухолевых клеток (высокая экспрессия), у 7 (100,0%) при M-ХЛЛ – менее чем на 30,0% опухолевых клеток (низкая экспрессия). Несовпадение мутационного статуса и экспрессии CD38 наблюдалось более чем у половины больных (55,4%), что подтверждает заключение о невоз- можности использования CD38 в качестве суррогатного маркера наличия мутаций генов IGHV, несмотря на то, что при Н-ХЛЛ экспрессия СD38 была ожидаемо более высокой, чем при M-ХЛЛ (5,6% против 1,4% соответствен- но, р=0,020). Н-ХЛЛ характеризовало преобладание аллеля дикого типа С гена IL4-590C>T и генотипов, его содержащих, увеличивающих шанс его вы- явления почти в 5 и в 18 раз соответственно. Этот вариант заболевания так- же в 13 раз чаще встречался у носителей генотипов с аллелем дикого типа G гена TNFα-308G>A, в присутствии мутантного аллеля С гена TLR9-1237T>C и генотипов, его содержащих (почти в 12 и в 13 раз соответственно). При проведении регрессионного анализа, позволяющего вычислить предпо- лагаемые отношения между наличием мутаций IGHV и полиморфизмом генов IL4-590C>T, TNFα-308G>A и TLR9-1237T>C, обнаружена достоверная связь наличия первых с полиморфными вариантами только двух локусов: IL4-590C>T (χ2=8,38, р=0,004, OR=2,33, 95%CI: 1,05-5,21) и TLR9-1237T>C (χ2=4,81, р=0,028, OR=11,5, 95%CI: 2,60-50,82).

Выводы. Выявление молекулярно-генетических маркеров представля- ют собой более технически простой, быстрый в выполнении (3 vs. 48 час) и в 10 раз более дешевый (750 vs. 7500 руб.) метод определения варианта заболевания. Это позволяет уже в дебюте заболевания при наличии только лишь оборудования для электрофоретической детекции продуктов ампли- фикации проводить стратификацию пациентов на группы риска. На основа- нии результатов исследования получен патент на изобретение № 2824086; опубл. 01.08.2024, бюл. №22.

Н.Н. Немсцверидзе, Е.В. Мотыко, А.Н. Кириенко, Д.В. Кустова, Е.В. Клеина, А.Ю. Кувшинов, С.С. Бессмельцев, С.В. Сидоркевич, И.С. Мартынкевич

МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ РЕЗИСТЕНТНОСТИ  МАНТИЙНОКЛЕТОЧНОЙ  ЛИМФОМЫ

ФГБУ «Российский научно-исследовательский институт гематологии и трансфузиологии» ФМБА, Санкт-Петербург

Введение. Мантийноклеточная лимфома (МКЛ) — редкий подтип В-кле- точной неходжкинской лимфомы (НХЛ), которая характеризуется наличием t(11;14), приводящей к гиперэкспрессии циклина D1. Данное заболевание в большинстве случаев характеризуется рефрактерным течением, в основе которого лежат различные клинико-биологические факторы, в том числе молекулярно-генетические механизмы развития резистентности.

Материалы и методы. В исследование включено 24 пациента с мантий- ноклеточной лимфомой III-IV стадии. Всем пациентам выполнено стандарт- ное цитогенетическое исследование (СЦИ), флуоресцеентная гибридиза- ация in situ (FISH), секвенирование следующего поколения (NGS). Анализ ДНК пациента проведен на платформе NextSeq Illumina методом парно-кон- цевого чтения. Интерпретация клинической значимости предположитель- но соматических вариантов проводилась на основании рекомендаций AMP (Association for Molecular Pathology), герминальных вариантов на основании рекомендаций ACMG (American College of Medical Genetics and Genomics). Об- работка и визуализация данных, полученных методом NGS, проводились с использованием специализированного пакета для анализа мутационного профиля – maftools (версия 2.22.0) в R Studio (версия 4.4.2). Материалы ис- следования были подвергнуты статистической обработке с использовани- ем методов параметрического и непараметрического анализа. Накопление, корректировка, систематизация исходной информации и визуализация по- лученных результатов осуществлялись в электронных таблицах Microsoft Office Excel. Статистический анализ проводился с использованием програм- мы IBM SPSS Statistics v.26 (разработчик – IBM Corporation). Оценка функции выживаемости пациентов проводилась по методу Каплана-Мейера. Анализ выживаемости пациентов проводился по методу регрессии Кокса.

Результаты. Медиана наблюдения составила 29 мес (4,8–133). Количе- ство линий терапии – 1(1–4). Частота общего ответа (ЧОО) в 1 линии со- ставила 67% (16), из них полный ответ – 54%(13), частичный ответ (ЧО) – 13%(3). Стабилизация заболевания достигнута у 8% (2) пациентов, прогрессия констатирована в 25% (6). По данным СЦИ нормальный кариотип выявлен у 19 пациентов (79%), t(11;14) – 3 (13%), del17p – 2 (8%), комплекс- ный кариотип – 2 (8%). При выполнении FISH t(11;14) обнаружена у 16 больных(67%), del17p – 4 (17%). При проведении NGS у 22 пациентов выяв- лен 101 аллельный вариант. Среди выявленных вариантов по клинической значимости 7,9% (8/101) составили патогенные, 5% (5/101) – условно пато- генные, 87,1% (88/101) – неопределенного клинического значения. Медиа- на аллельной нагрузки (VAF) составила 7,8% (3,0–93,4%). Значение VAF не отличалось в зависимости от клинической значимости, р = 0,8545. У пато- генных мутаций медиана VAF составила 13,9%, условно патогенных – 17,3%, неопределенного значения – 7,3%. Наиболее часто мутации определялись в генах АТМ (36%), RYR1 (27%), BCR (27%), KMT2D (23%). Мутация в гене ATM имела статистически значимое влияние на общую выживаемость (ОВ). По данным проведенного анализа отмечалось увеличение риска смерти в HR= 4,31 (95% ДИ 1,15–17,04), р = 0,031. Медиана ОВ в группе с мутаций АТМ составила 12,9 (95% ДИ 10,2–НД) мес, в группе без мутации – не достигнута. 3-летняя ОВ в группе без мутации – 81,1% (95% ДИ 63,9–100). 3-летняя ОВ в группе с мутаций АТМ – 42,9% (95% ДИ 19,2–100).

Выводы. МКЛ представляет собой гетерогенное заболевание с различ- ными проявлениями, клиническими и биологическими факторами риска и подходами к лечению. Несмотря на лучшее понимание биологии и разра- ботку эффективных терапевтических стратегий, приводящих к улучшению выживаемости, прогноз у пациентов с МКЛ по-прежнему неблагоприятный. Необходимо дальнейшее изучение молекулярно-генетических механизмов развития резистентности, в том числе применения NGS, с целью оптимиза- ции диагностических алгоритмов для определения прогноза заболевания.

Д.О. Оразханов, М.С. Исламов, З.Д. Юнусова, Ф.Р. Таштемиров

ПОТЕРЯ ПОЛОВОЙ ХРОМОСОМЫ ПРИ ОСТРОМ МИЕЛОИДНОМ ЛЕЙКОЗЕ

Республиканский Специализированный Научно-Практический Медицинский Центр Гематологии (РСНПМЦГ), Ташкент, республика Узбекистан

Введение. Приобретенная потеря половой хромосомы (-X) как един- ственная аномалия редко обнаруживается в костном мозге (КМ), и ее кли- ническое значение остается неизвестным, при этом ее частота увеличивает- ся с возрастом. Неясно, является ли потеря половых хромосом критическим мутационным событием для неопластической трансформации или генетическим изменением, связанным со старением. Мы обнаружили 3 пациентов с изолированной (–Х) в КМ. Все пациенты были женщинами с диагнозом острый миелоидный лейкоз, медиана возраста 40,6 лет. При медиане кли- нического наблюдения в 4,6 месяца и применении цитогенетического ис- следования КМ, мы стремились определить влияние потери (-Х) на эффек- тивность лечения.

Цель. Оценить влияние потери (–Х) хромосомы на течение заболевания и эффективность лечения пациентов с ОМЛ.

Материалы и методы. В ретроспективное исследование включены впервые диагностированные пациенты в возрасте от 20 до 68 лет, прохо- дивших лечение в РСНПМЦГ в период с апреля 2024 по февраль 2025 гг. Всем пациентам выполнялось морфологическое изучение костного мозга, кариотипирование, иммунофенотипирование и молекулярно-биологи- ческое исследование. Кариотипирование проводили на клетках КМ с по- мощью микроскопа Axio Scope.A1 (Zeiss, Германия)) с цифровой камерой. Поиск метафаз выполняли при увеличении х200, фотофиксацию и анализ – при увеличении х1000. Анализ метафаз по фотоизображениям проводили с помощью программы «ВидеоТесТ-Карио 3.1» (Россия).

Результаты. В исследование включены 3 пациента, все женщины, медиа- на возраста 40,6 лет. (–Х) являлся единственным цитогенетическим и моле- кулярно-генетическим изменением, обнаруженным в КМ. Клиническое те- чение заболевания характеризовалось изолированной тромбоцитопенией – медиана 21х109/л в дебюте. Все пациенты не отвечали на индукционный курс.

У 1 пациента отмечалась неудача индукции ремиссии (7+3 с дауноруби- цином) при дальнейшем развитии острого повреждения почек, приведшим к летальному исходу. У 2 пациентов также не удалось достичь ремиссии по- сле применения стандартных протоколов химиотерапии (AzaIdaAra-C у 2-й и 7+3 с даунорубицином у 3-й пациентки). Смена терапии на AzaVen (паци- ент №2) и 7+3 с митоксантроном (пациент №3), позволила достичь ремис- сии. Контрольное цитогенетическое исследование КМ после подтвержде- ния клинико-гематологического ответа показало нормальный диплоидный кариотип.

Выводы. В наше исследование было включено 3 пациентки с потерей (-Х), что не дает сделать выводов о влиянии данной хромосомной аберрации на выживаемость. Однако, неудача терапии у всех 3 пациентов дает понять, что пациентки с таким изменением кариотипа требуют индивидуального подбора терапии и оценки ее эффективности с помощью кариотипирова- ния.

 В.К. Охота, А.В. Кохно, Т.В. Макарик, А.Б. Судариков, Т.Н. Обухова, В.Н. Двирнык, С.А. Глинкина, Е.Н. Паровичникова

МУТАЦИЯ V617F В ГЕНЕ JAK2 У ПАЦИЕНТОВ С МИЕЛОДИСПЛАСТИЧЕСКИМИ СИНДРОМАМИ И ДЕЛЕЦИЕЙ ДЛИННОГО ПЛЕЧА 5 ХРОМОСОМЫ

Федеральное государственное бюджетное учреждение

«Национальный медицинский исследовательский центр гематологии» Министерства здравоохранения Российской Федерации, Москва

Введение: мутация V617F в гене JAK2 у пациентов с миелодиспластиче- скими синдромами (МДС) встречается в 5-6% случаев, у пациентов с МДС и изолированной делецией длинного плеча 5 хромосомы (del(5q)) ее частота описана в 6% случаев. У данной группы пациентов наличие мутации ассо- циировано с более высокими значениями тромбоцитов, повышенной кле- точностью костного мозга (КМ) и фиброзом стромы (ФС). Прогностическая значимость мутации у пациентов с del(5q) не определена.

Цель: впервые в Российской Федерации провести исследование и выя- вить частоту встречаемости мутации V617F в гене JAK2 у пациентов с МДС, в том числе с изолированной del(5q), в дебюте заболевания, определить ее влияние на клинико-лабораторные показатели и общую выживаемость.

Материалы и методы: исследование проведено у 79 пациентов с МДС, наблюдавшихся в ФГБУ «НМИЦ гематологии» с 2009 по 2024 год, в возрасте 19-89 (медиана (Ме) – 63) лет. Соотношение женщин и мужчин было 67:12. Медиана времени наблюдения составила 18 месяцев. Отличительной осо- бенностью всех пациентов было наличие del(5q). Распределение по вариан- там МДС было следующим: МДС-5q – 57 (72%) пациентов, МДС-МД – 6 (8%),

МДС-ИБ-1 – 13 (16%) и МДС-ИБ-2 – 3 (4%). Диагноз устанавливали на осно- вании цитологического, гистологического, цитогенетического исследова- ний костного мозга. Выделение ДНК и РНК проводили из 5-10 мл костного мозга с использованием стандартной солевой экстракции и с помощью на- бора реагентов «Рибо-золь-D» (Интралабсервис, Россия). Мутацию V617F в гене JAK2 количественно определяли с помощью «Набора реагентов для об- наружения мутации V617F G/T гена JAK2» (Синтол, Россия) в соответствии с инструкциями производителя. Все случаи были протестированы на ph-не- гативность с использованием набора реагентов «Реверта-L» и «АмплиСенс вариант FRT» (Интралабсервис, Россия).

Результаты: все пациенты были разделены на две группы: МДС-5q – 57 (72%) и другие варианты МДС – 22 (28%) пациента. В группе МДС-5q показатели крови были: гемоглобин – 37 – 124 (Ме – 67) г/л, тромбоциты 101 – 1144 (Ме – 340) х 109/л, лейкоциты 2,05 – 12,4 (Ме – 4,0) х 109/л. В миело- грамме: количество бластных клеток (БК) 0 – 4,8 (Ме – 2)%, эритроидный ряд 0 – 41,6 (Ме – 8,7)%. В трепанобиоптате: клеточность КМ была повы- шена у 12 пациентов, ФС 2-3 степени по Gomori у 3 пациентов. Селезенка была увеличена у 12. В группе пациентов с другими вариантами МДС в ге- мограмме: гемоглобин – 42-114 (Ме – 68) г/л, тромбоциты 28-869 (Ме – 238) х 109/л, лейкоциты 1,8 – 63,3 (Ме – 3,25) х 109/л. В миелограмме: БК – 0,8 – 17 (Ме – 6) %, эритроидный ряд 0 – 34,4 (Ме – 13,2) %. В трепанобиоптате: клеточность КМ была повышена у 4 пациентов, ФС 2-3 степени по Gomori у 3 пациентов. Селезенка была увеличена у 3 пациентов. При стандартном цитогенетическом исследовании del(5q) была выявлена у 66 (83%) паци- ентов, при FISH-исследовании у 13 (17%) пациентов. Утрата региона del(5) (q13q33) была обнаружена у 35 (53%) пациентов, del(5)(q15q33) у 26 (39%), у 5 (8%) были делетированы другие локусы хромосомы 5. Мутация V617F в гене JAK2 была выявлена у 8 (10,1%) пациентов во всей группе, из них у 5 (8,7%) в группе МДС-5q и у 3 (13,6%) с другими вариантами МДС. Аллельная нагрузка составила от 1% до 32%. Все пациенты с мутацией V617F в гене JAK2 были зависимы от трансфузий эритроцитсодержащих компонентов донорской крови (ЭСКДК).

Проанализированы две группы JAK2+ и JAK2-негативных (JAK2-) пациен- тов с диагнозом МДС-5q (n=57). Не обнаружено статистически значимых раз- личий показателей гемоглобина и лейкоцитов, но обнаружена тенденция к более высоким значениям тромбоцитов в группе JAK2+ (Ме-451 х109/л) vs JAK2– (Ме-325 х109/л) (р=0,078). Не выявлено статистически достоверных различий в клеточном составе аспирата КМ, за исключением тенденции к более высоким значениям базофилов в группе JAK2+ (Ме-1,6%) vs JAK2– (Ме- 0,5%) (р=0,073). Обнаружена статистически достоверная связь между нали- чием мутации V617F в гене JAK2 и локусом del(5)(q13q33): 100% в группе JAK2+ и 38% в группе JAK2– (р=0,0127). Значимых различий между двумя группами по клеточности КМ, наличию ФС и размеров селезенки, а также присутствию добавочных аномалий кариотипа не было выявлено. Общая выживаемость (ОВ) в обеих группах статистически достоверно не различа- лась (р=0,7310).

Выводы: у пациентов с МДС-5q и мутацией V617F в гене JAK2 выявлена тенденция к более высоким значениям тромбоцитов и базофилов в костном мозге. Наличие мутации V617F ассоциировано с определенным цитогенети- ческим вариантом del(5)(q13q33).

И.Е. Павлова1, Е.В. Кузьмич1, А.А. Павлова1,2, Т.В. Глазанова1, Л.Н. Бубнова1

IL1А~IL1В~IL1RA ГАПЛОТИПЫ У БОЛЬНЫХ МНОЖЕСТВЕННОЙ МИЕЛОМОЙ С РАЗЛИЧНОЙ СТЕПЕНЬЮ ПОРАЖЕНИЯ КОСТНОЙ ТКАНИ

1Федеральное государственное бюджетное учреждение «Российский научно-исследовательский институт гематологии и трансфузиологии Федерального медико-биологического агентства», г. Санкт-Петербург 2Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования «Санкт-Петербургский государственный университет», г. Санкт-Петербург

Введение. Семейство IL-1 включает в себя 3 гомологичных белка: IL- 1α, IL-1β, IL-1RA (антагонист рецептора IL-1), которые кодируются генами IL1А, IL1В и IL1RA соответственно. Однонуклеотидные замены в этих генах приводят к изменению характера их экспрессии, что может быть значимым при множественной миеломе (ММ), так как в основе патофизиологического механизма разрушения костной ткани при данном заболевании лежит уси- ление остеокластогенеза и костной резорбции. Как известно, к биологиче- ским функциям IL-I относится прорезорбтивный эффект.

Цель исследования: анализ IL1А~IL1В~IL1RA гаплотипов у больных множественной миеломой с различной степенью поражения костной ткани. 

Пациенты и методы. В составе обследованной группы 80 пациентов с ММ в возрасте 44-87 лет (медиана – 70 лет), 54 женщины и 26 мужчин. Паци- енты были разделены на 2 группы в соответствии с системой стадирования Durie-Salmon: группа 1 – II стадия (n=42), группа 2 – III стадия (n=38). В со- ставе контрольной группы (группа 3) 100 потенциальных доноров костного мозга в возрасте 20-60 лет (медиана – 40 лет), 51 мужчина и 49 женщин. Од- нонуклеотидные полиморфизмы rs1800587 (IL-1α, -889C/T), rs3087258 (IL- 1β, -511C/T), rs1143634 (IL-1β, +3962C/T), rs315952 (IL1RA, mspa1 11100T/C) исследовали с помощью набора Cytokine Genotyping Kit («Invitrogen», США). Для расчета частот аллелей и гаплотипов использовали программу Arlequin ver. 3.5, EM алгоритм. Различия в частотах аллелей и гаплотипов между группами анализировали с помощью программы Статистика 10, χ2-теста, 2-стороннего точного теста Фишера.

Результаты. Как установлено, частота аллеля IL1α(-889T) у пациентов с тяжелыми остеолитическими поражениями (группа 2) значительно выше, чем в контрольной группе (0,4605 против 0,2700; χ2 9,150; p=0,003). Частота аллеля IL-1β(+3962T) в группе 2 также увеличена по сравнению с контрольной группой (0,4211 против 0,2300; χ2 9,915; p=0,002). Гаплотип IL-1α(- 889C)~IL-1β(-511C)~IL-1β(+3962C)~IL1RA(mspa1 11100С) (гаплотип CCCС), второй по распространенности в контрольной группе, достоверно реже определяется у пациентов группы 2 (0,0925 против 0,2059; χ2 4,131; p=0,04). Гаплотип IL-1α(-889T)~IL-1β(-511T)~IL-1β(+3962T)~IL1RA(mspa1 11100C) (гаплотип TTTC) значительно более распространен у пациентов группы 2 по сравнению с группой контроля (0,0679 против 0,0116; χ2 4,861; p=0,03). Распределение изученных гаплотипов в группах сравнения представлено в таблице 1.

Выводы.  Результаты  нашего  исследования  свидетельству- ют о наличии ассоциации гаплотипа IL-1α(-889T)~IL-1β(-511T)~IL- 1β(+3962T)~IL1RA(mspa1 11100C) с более тяжелым поражением костной ткани при множественной миеломе. 

Н.К. Пастухов, С.Н. Бондаренко, А.Г. Смирнова, Д.К. Жоголев, Б.И. Аюбова, И.С. Моисеев, А.Д. Кулагин

ВЕНЕТОКЛАКС-СОДЕРЖАЩАЯ ТЕРАПИЯ ПРИ ВПЕРВЫЕ  ВЫЯВЛЕННОМ ОСТРОМ МИЕЛОИДНОМ ЛЕЙКОЗЕ С ЦИТОГЕНЕТИЧЕСКИМИ АНОМАЛИЯМИ ВЫСОКОГО  РИСКА

НИИ детской онкологии, гематологии и трансплантологии им. Р. М. Горбачевой ФГБУ ВО «Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. акад. И. П. Павлова» Минздрава России, Санкт-Петербург

Введение. Наличие цитогенетических аномалий высокого риска ассоции- ровано с неудовлетворительным ответом на стандартную химиотерапию, вы- соким риском рецидива и ухудшением выживаемости у пациентов с острым миелоидным лейкозом (ОМЛ). Аллогенная трансплантация гемопоэтических стволовых клеток (Алло-ТГСК) остается единственной терапевтической оп- цией, обеспечивающей вероятность долгосрочного контроля над заболе- ванием. Тем не менее, оптимальная индукционная стратегия в этой группе больных не определена. Одно из возможных направлений – использование у пациентов высокого риска венетоклакс-содержащих схем лечения, независи- мо от возраста или статуса сопутствующей патологии.

Цель. Оценить результаты венетоклакс-содержащего лечения при ОМЛ с цитогенетическими аномалиями высокого риска.

Материалы и методы. За период с 2020 по 2024 год в клинике НИИ ДОГиТ им. Р.М. Горбачевой наблюдалось 134 пациента с впервые выявленным ОМЛ, которые получали лечение на основе венетоклакса. Спектр цитогенетиче- ских аномалий, которые расценивались как неблагоприятные был определен согласно рекомендациям ELN 2022. Общая, бессобытийная выживаемость (ОВ, БРВ) были проанализированы с использованием метода Каплана-Мей- ера с последующим однофакторным анализом посредством регрессионной модели Кокса, с Алло-ТГСК в качестве, зависимой от времени ковариаты. Ку- мулятивная частота рецидивов (ЧР), безрецидивная летальность (БРЛ) оце- нивались с использованием функции кумулятивной частоты с летальным исходом в качестве конкурирующего события.

Результаты. Цитогенетические аномалии высокого риска были выявлены у 41 пациента (31%). В этой группе медиана возраста составила 58 (19-79) лет.

У 16 (39%) пациентов был выявлен комплексный кариотип (КК), у 16 (22%) – аномалии 7 хромосомы. По 6 больных (15%) имели нарушения 3 и 5 хромосом. У 2 (5%) – транслокации с вовлечением 11q23, и по 1 (2%) больному с делецией 17q и транслокацией 6;9. У 15 (37%) – констатировано наличие моносомного кариотипа (МК). У 9 (22%) пациентов отмечалась трансформация из пред- шествующего миелопролиферативного заболевания, у 6 (15%) был анамнез противоопухолевого лечения. 32 (78%) больных получала комбинацию вене- токлакса с азацитидином, 6 (15%) с децитабином и 3 (7%) с низкими дозами цитарабина. Медиана времени наблюдения, рассчитанная с помощью обрат- ного метода Каплана-Мейера, составила 17 (1-42) месяцев. 10 (25%) достигли полной ремиссии (ПР), 18 (44%) – ПР с неполным восстановлением гематоло- гических показателей, 3 (7%) – морфологически свободного от лейкоза статуса. Рефрактерное течение заболевание отмечалось у 9 (22%) пациентов, отмечал- ся один случай ранней летальности (2%). 18-месячная ОВ составила 42% (95% ДИ, 23-61), БСВ – 30% (95% ДИ, 14-48). В однофакторном анализе МК был ассо- циирован с ухудшением ОВ (ОР 2.90; 95% ДИ 1.14-7.39; p=0.03) и БСВ (ОР 2.27; 95% ДИ 1.00-5.21; p=0.05). КК был ассоциирован с ухудшением БСВ (ОР 2.47; 95% ДИ 1.07-5.71; p=0.03). ЧР составила 53% (95% ДИ, 26-76), БРЛ – 3% (95% ДИ, 0-14). Алло-ТГСК была выполнена 12 (29%) больным (9 – в первой ПР, 2 – с рефрактерным течением ОМЛ, 1 – вне ремиссии после рецидива). Выполнение Алло-ТГСК было ассоциировано с улучшением ОВ (ОР 0.28; 95% ДИ 0.09-0.89; p=0.03), отмечался тренд к улучшению БСВ (ОВ 0.21; 95% ДИ 0.03-1.27; p=0.09). 

Выводы. Среди больных, достигших ответа на лечение, большая часть имела ПР с неполным восстановлением гематологических показателей. Вы- живаемость при использовании биологической терапии остается неудовлет- ворительной, особенно у пациентов с КК или МК. Алло-ТГСК может улучшить долгосрочные результаты и должна быть реализована в кратчайшие сроки от постановки диагноза.

А.О. Пестрикова, Е.А. Попонина, С.В. Попова, Е.В. Соболева, А.С. Безруков, Н.В. Исаева, М.Л. Морозова, К.А. Воробьев

ОЦЕНКА ЦИТОТОКСИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ МОДУЛЬНОЙ СИСТЕМЫ НА ОСНОВЕ Т-ЛИМФОЦИТОВ С УНИВЕРСАЛЬНЫМ ХИМЕРНЫМ АНТИГЕННЫМ РЕЦЕПТОРОМ

Федеральное государственное бюджетное учреждение науки «Кировский научно-исследовательский институт гематологии и переливания крови Федерального медико-биологического агентства», г. Киров

 Введение. Модульные (универсальные) UCART – клетки (англ. universal chimeric antigen receptor T-cell) способны распознавать и связывать целевой опухолевый антиген через молекулу-посредник (конъюгат), что приводит к развитию цитотоксического эффекта и лизису злокачественной клет- ки-мишени. В предлагаемой модульной системе конъюгат получен путем присоединения белка барназа по сахарной компоненте анти-СD20-моно- клонального антитела (МКАТ) с использованием молекулярного спейсера — дигидразида адипиновой кислоты. Распознающая внеклеточная часть UCAR содержит белок барстар, эффективно связывающийся с барназой, что позволяет регулировать цитотоксический эффект UCART-клеток путем из- менения количества конъюгата.

Цель. Оценить цитотоксическую активность модульной системы на ос- нове Т-лимфоцитов с универсальным химерным антигенным рецептором на клеточной модели in vitro.

Материалы и методы. Т-лимфоциты выделяли из крови доноров с ис- пользованием набора EasySep Human T Cell Isolation Kit (StemCell, Канада), инкубировали в среде ImmunoCult™-XF («Stemcell Technologies», Канада), со- держащей ИЛ-2 (10 нг/мл), ИЛ-15 (50 нг/мл) (Scistore, Россия) и активатор ImmunoCult Human CD3/CD28/CD2 T Cell Activator (StemCell, Канада). Т-клет- ки трансдуцировали лентивирусным вектором с геном UCAR с внесением полибрена (5 мкг/мл). Эффективность трансдукции оценивали методом проточной цитофлуориметрии (FACS Canto II, «BD Bioscience», США) по де- текции шарнирной внеклеточной области IgG4, входящей в состав UCAR.

Для оценки цитотоксичности модульной системы UCART-лимфоциты и модельные клетки линии Raji (иммортализованные В-лимфобласты CD20+) культивировали совместно в соотношении 1:1 (n=16) с внесением конъюга- та в концентрациях 0,33, 3,33, 16,67 мкг/мл культуры при 37°С и 5% CO2. В качестве контрольных проб использовали отдельно культуры UCART, Raji, а также их смесь в соотношении 1:1 (n=11) без добавления молекулы-посред- ника. Оценку результатов проводили через 24 ч, регистрировали процент живых клеток по проникновению флюоресцентного красителя 7-амино- актиномицина, а также изменение количества CD3+ UCART-лимфоцитов и CD20+ модельных клеток Raji методом проточной цитофлуориметрии.

Расчет цитотоксичности (С) проводили по формуле (1): C= (1- a) x 100 %

где С – цитотоксичность UCART-лимфоцитов;

а – абсолютное количество живых опухолевых клеток;

b – абсолютное количество живых опухолевых клеток в контрольной пробе.

Результаты представляли в виде медианы и интерквартильного диапазона [Q1;Q3]. Статистическую значимость различий показателей в группах оценивали с использованием критерия Манна-Уитни, которые считали зна- чимыми при p<0,05.

Результаты. При культивировании клеток Raji в течение 24 ч отмечено увеличение их количества в 1,2 раза [0,9; 1,2], жизнеспособность составила — 96,5% [94,7; 98,0]. Количество Т-лимфоцитов за сутки практически не из- менялось, доля живых клеток – 96,6% [95,1; 97,3], СD3+ клеток – 98,1% [97,9; 98,8], при этом содержание Т-лимфоцитов, экспрессирующих UCAR, составило 54,2% [35,9; 67,1]. Совместное культивирование клеток UCARТ и Raji без молекулы-посредника не приводило к существенному изменению их количественного соотношения: 44,2% [42,4; 49,8] CD3+ и 41,2% [40,0; 45,6] CD20+ клеток. Внесение конъюгата сопровождалось снижением числа опухолевых клеток в смеси через 24 ч совместного культивирования с UCARТ. При кон- центрации молекулы-посредника 0,33 мкг/мл количество CD20+ опухоле- вых клеток сократилось до 17,1% [16,7; 20,1] (р=0,004), С = 48,0% [47,3; 50,7]. Повышение количества конъюгата до 3,33 мкг/мл приводило к увеличению цитотоксичности до 80,6% [79,3; 82,3] (р=0,019), а также уменьшению доли опухолевых клеток до 7,7% [6,7; 8,6] (р=0,017). Максимальная из исследо- ванных концентраций конъюгата – 16,67 мкг/мл обуславливала еще более выраженную цитотоксичность - 90,0% [88,4; 91,3] (р=0,013), и минималь- ное остаточное количество CD20+ модельных клеток равное 2,7% [2,5; 4,3] (р=0,010).

Выводы. Разработанная модульная система UCARТ — лимфоцитов при добавлении конъюгата «барназа - анти – CD20 – МКАТ» проявила выражен- ную функциональную активность. При этом концентрация молекулы-по- средника (0,33, 3,33 и 16,37 мкг/мл) влияла на уровень цитотоксического эффекта UCARТ (С = 48,0%, 80,6% и 90,0%) соответственно.

И.С. Пискунова, Т.Н. Моисеева, Л.С. Аль-Ради, Т.Н. Обухова, А.Б. Судариков, Б.В. Бидерман, М.С. Куликов, С.Э. Старченко, А.В. Кохно

ЧАСТОТА ВЫЯВЛЕНИЯ МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИХ  МАРКЕРОВ У БОЛЬНЫХ ХЛЛ

ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр гематологии» Министерства здравоохранения Российской Федерации, г. Москва

Введение. Хронический лимфоцитарный лейкоз (ХЛЛ) — наиболее рас- пространённый вид лейкоза у взрослых, характеризующийся клональной пролиферацией зрелых В-лимфоцитов. Несмотря на относительно медлен- ное течение, заболевание отличается значительной клинической и биоло- гической гетерогенностью, что определяет вариабельность ответа на терапию и прогноз. Молекулярно-генетические аберрации играют ключевую роль в патогенезе, прогнозе и выборе терапии.

Цель. Изучить частоту выявления делеции 17p13, 11q22, 13q14, трисо- мии 12, комплексного кариотипа, мутаций генов TP53 и NOTCH1, мутацион- ного статуса генов IGHV у пациентов с ХЛЛ, которые наблюдаются в НМИЦ Гематологии, и их ассоциацию с клиническим течением заболевания, вклю- чая прогрессирование и ответ на терапию.

Материалы и методы. В исследование включены больные ХЛЛ (N=200), наблюдавшиеся в НМИЦ Гематологии в период с 2012г по 2024г. Медиана возраста 57 лет (27-82). Из 220 пациентов 149 (67,7%) получили не менее 1 линии терапии по поводу прогрессии ХЛЛ, без лечения (динамическое на- блюдение) -71 пациент (32,3%). Среди схем в 1 линии режим FCR получили 43% (35/81) пациентов, режим RB – 13,5% (11/81), 22,2% (18/81) получили различные виды иммунохимиотерапии (R-CHOP, хлорамбуцил, RCD, моно- терапия ритуксимабом и др). Таргетную терапию (иТКБ – ибрутиниб/ака- лабрутиниб, ингибитор белка BCL2– венетоклакс) получили 20,9% (17/81) пациентов. Для оценки цитогенетических поломок был использован FISH анализ на делецию 17p13, 11q22, 13q14, трисомия 12, а также проведено стандартное цитогенетическое исследование с целью выявления пациен- тов с комплексным кариотипом. Молекулярный анализ проводился на де- текцию мутаций генов TP53 и NOTCH1, определение мутационного статуса генов IGHV. Клинические данные включали стадирование по Rai/Binet, кон- центрация β2-микроглобулина, активность ЛДГ и др. Статистическая обра- ботка: SPSS, методы Каплана-Мейера, регрессионный анализ.

Результаты. Мутационный статус генов IGHV был определен у 135 (61,3%) из 220 пациентов, мутированный вариант у 47 (34,8%), немути- рованный у 88 (65,1%). При FISH исследовании делеция 13q14 выявлена у 52,3% (45/86), трисомия 12 –15,2% (13/85), делеция 11q22 – 25%(21/84), делеция 17p13 – 11,6% (13/112). При молекулярном исследовании мутации гена TP53 выявлены у 22,5%(7/31), мутация NOTCH1 у 4 из 6 пациентов. Стандартное цитогенетическое исследование выполнено у 20% (44/220) пациентов, комплексный кариотип (более 3 цитогенетических поломок) выявлен у 13 (29,5%) пациентов. Выявлено статистически значимое сни- жение БРВ при немутированном варианте генов IGHV (p=0,0135) и при наличии аберраций гена TP53 (делеция 17p13/13 или мутация гена TP53, p=0,0096). Статистически значимого влияния молекулярно-генетических параметров на ОВ не выявлено.

Выводы. В ходе проведенного исследования была проанализирована частота встречаемости ключевых молекулярно-генетических маркеров у пациентов с ХЛЛ. Наиболее клинически значимые аномалии, такие как немутированный статус генов IGHV, аберрации гена TP53 достоверно ассо- циированы с неблагоприятным прогнозом заболевания. Результаты под- черкивают необходимость рутинного использования молекулярно-гене- тического тестирования для стратификации пациентов и персонализации лечения, особенно в эпоху таргетных препаратов.

Т.И. Поспелова1, Е.Н. Воропаева1,2, О.Б. Серегина1, М.С. Войтко1, Т.Н. Бабаева1, В.Н. Максимов1,2

СПЕКТР МУТАЦИЙ В ГЕНЕ MIR-142 ПРИ ДИФФУЗНОЙ В-КЛЕТОЧНОЙ КРУПНОКЛЕТОЧНОЙ ЛИМФОМЕ

1Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования «Новосибирский государственный медицинский университет» Минздрава России, Новосибирск

2Научно-исследовательский институт терапии и профилактической медицины – филиал Института цитологии и генетики Сибирского отделения РАН, Новосибирск

3Государственное бюджетное учреждение здравоохранения Новосибирской области «Городская клиническая больница №2», Новосибирск

Введение. Современные знания об изменениях в нуклеотидной после- довательности генома вне локусов расположения белок-кодирующих генов, крайне ограничены. MiR-142 является одной из ключевых онкосупрессор- ных микроРНК при лимфоидных новообразованиях человека и животных. На небольших группах образцов было показано, что ген, кодирующий дан- ную микроРНК, рекуррентно мутирует при гемобластозах: остром миелоид- ном лейкозе, хроническом лимфолейкозе и различных типах В-клеточных лимфом.

Цель исследования – оценить частоту, спектр и функциональный эф- фект мутаций в гене MIR-142 на крупной выборке образцов опухолевой ткани пациентов с диффузной В-клеточной крупноклеточной лимфомой (ДВКЛ).

Материал и методы. Проанализировано 125 образцов ДНК, выделен- ной из FFPE-блоков (фиксированных формалином, залитых парафином) биоптатов опухолевых лимфоузлов пациентов с ДВКЛ Выполнялось прямое секвенирование по Сенгеру кодирующей части и прилегающих областей гена MIR-142 и анализ in silico вторичной структуры и термостабильности «шпильки», а также генов-мишеней для мутантных вариантов микроРНК.

Результаты. В исследованной группе биообразцов опухолевой ткани пациентов с ДВККЛ в 21/125 (16,8%) случаев были выявлены однонуклео- тидные замены в MIR-142 в гетерозиготном состоянии. Всего 26 вариантов нуклеотидной последовательности (ВНП). Отметим, что в 3-х случаях имели место одновременно по две находки, в 1-м случае – три мутации в MIR-142 (n.35G/A, n.39G/A и n.52C/T) в образце.

Анализ распределения ВНП по последовательности гена показал, что только три из них (11,5%) были локализованы в «ключевых» последова- тельностях miR-142-5p и miR-142-3p, тогда как остальные – в других участ- ках последовательности зрелых микроРНК или их предшественников.

Анализ выявил значительное изменение профиля предсказанных взаи- модействий микроРНК-мишень в случае мутаций в «ключевых» последо- вательностях n.33U/A miR-142-5p, а также n.68G/A и n.69U/C miR-142-3p. Показано, что в подавляющем числе случаев ВНП приводили к снижению минимальной свободной энергии и, следовательно, и термодинамической стабильности «шпильки», а также влияли на ее структуру.

Выводы. MIR-142 является наиболее часто мутирующим геном микроР- НК при ДВКЛ. Мутации широко распространены по последовательности гена. ВНП «ключевой» последовательности нарушают взаимодействие с мишенями, а остальные меняют термодинамические свойства и нарушают стабильность молекулы микроРНК. При множественных мутациях наблю- дается наиболее глубокое изменение вторичной структуры предшествен- ника микроРНК.

Финансирование. Работа выполнена при поддержке гранта РНФ №25- 25-00068.

В.Г. Потапенко1, Е.А. Бехтерева2, Е.Н. Имянитов3, С.В. Орлов4, Е.Е. Леенман2, Л.В. Стельмах4, И.В. Цыганков4, Н.В. Федуллова5, Ж.-Ф. Эмиль6,7,

ПРИМЕНЕНИЕ МЕК-ИНГИБИТОРА ПРИ ГИСТИОЦИТАРНОЙ САРКОМЕ. КЛИНИЧЕСКОЕ НАБЛЮДЕНИЕ

1ООО «Многопрофильная клиника «БалтМед», Санкт-Петербург

2ФГБОУ ВО «Северо-Западный государственный медицинский университет им. И.И. Мечникова», Санкт-Петербург

3ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр онкологии им. Н.Н. Петрова», Санкт-Петербург

4ФГБОУ ВО «Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. акад. И.П. Павлова», Санкт-Петербург

5ГБУЗ «Городская больница №15», Санкт-Петербург

6Госпиталь им. Амбруаза Паре, Булонь-Бийанкур (Франция)

7Версальский университет Сен-Кантен-ан-Ивелин, Версаль (Франция)

Введение. Эффективность неизбирательной химиотерапии при гисти- оцитарной саркоме низка. Считается, что в патогенезе гистиоцитозов веду- щая роль принадлежит мутациям генов, кодирующих митогенактивируемые протеинкиназы (MAПK), в связи с чем с успехом применяются МАПК– (МЕК-, BRAF– и др.) ингибиторы. В реферативных базах не найдено опубликованных наблюдений лечения гистиоцитарной саркомы МЕК-ингибитором при отсут- ствии таргетной мутации в генах, кодирующих MEK-киназы.

Клиническое наблюдение. У женщины 70 лет в июне 2022 года появилась умеренная боль в эпига- стрии. Проводилась консервативная антисекреторная терапия, однако боль нарастала и появилось снижение веса. Через девять месяцев обнаружено новообразование, перекрывающее просвет тонкого кишечника, в связи с чем произведена резекция с формированием анастомоза. После операции началась диарея до 10 раз в сутки и продолжилось похудание.

По данным иммуногистохимического исследования, диагностирована гистиоцитарная саркома с экспрессией PDL1. При панельном секвенирова- нии нового поколения выявлена мутация 5-го (максимального) класса па- тогенности в гене CSF1R c.1697C>G (Pro566Arg) с вариантной аллельной ча- стотой 15% (панель секвенирования ДНК состояла из 69 генов кодирующих MAПK), других мутаций в том числе генов кодирующих МЕК-киназы не вы- явлено. По результатам позитронно-эмиссионной томографии, совмещён- ной с компьютерной (ПЭТ-КТ), выявлено образование, включающее стенку толстой кишки, размерами 86х46 мм с максимальной степенью накопления радиофармпрепарата (SUV) 15.1. Аналогичные образования наблюдались межпетельно и в полости малого таза диаметром до 60 мм с SUV до 19. Диа- гностирована гистиоцитарная саркома с поражением абдоминальных лим- фоузлов, экспрессией PDL1 и мутацией в гене CSF1R.

Проведено два курса терапии по программе «СНОР», один курс «GemOx» c ниволумабом — без эффекта. В дальнейшем пациентка получила один курс лечения леналидомидом с пембролизумабом и монотерапию леналидо- мидом в течение полугода с тенденцией к стабилизации состояния. Потом нарос диарейный синдром, возобновилось снижение веса и появилось ре- цидивирующее желудочно-кишечное кровотечение с потребностью в регу- лярных гемотрансфузиях. Повторные ПЭТ-КТ показали увеличение разме- ров и метаболической активности опухолевых очагов.

CSF1R относится к дистальным, мембранным белкам МАПК-пути, однако в связи с недоступностью в РФ CSF1R-ингибитора начато лечение препаратом, воздействующим на проксимальный белок МАПК-каскада – MEK-киназу. С июля 2024 года пациентка получает траметиниб 2 мг/сут. В течение трёх ме- сяцев от начала стул уредился с 7-8 до 3-4 раз в день, стабилизировался вес, прекратилось желудочно-кишечное кровотечение, разрешилась трансфузи- онная зависимость и улучшилось общее самочувствие. Контрольные КТ через три и шесть месяцев показали уменьшение размеров объёмных образований брюшной полости. Терапия продолжена, переносимость удовлетворительная. 

Заключение. Вопреки отсутствию таргетной мутации, терапия МЕК-ингибитором привела к стойкому ответу.

А.М. Раджабова, Е.В. Мотыко, А.Н. Кириенко, Д.В. Кустова, И.С. Мартынкевич, С.В. Сидоркевич

ИССЛЕДОВАНИЕ МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИХ НАРУШЕНИЙ У БОЛЬНЫХ ОСТРЫМИ МИЕЛОИДНЫМИ ЛЕЙКОЗАМИ МЕТОДОМ СЕКВЕНИРОВАНИЯ НОВОГО ПОКОЛЕНИЯ (NGS)

Федеральное государственное бюджетное учреждение «Российский научно-исследовательский институт гематологии и трансфузиологии Федерального медико-биологического агентства», г. Санкт-Петербург

Введение. Прогноз и тактика ведения пациентов с острыми миелоидны- ми лейкозами (ОМЛ) определяется молекулярно-генетическим статусом. Геномный ландшафт пациентов с ОМЛ очень разнообразен – особенное ме- сто занимает группа пациентов с генетическими и хромосомными аберрациями, определяющими неблагоприятный прогноз. На сегодняшний день метод секвенирования нового поколения (NGS) позволяет одновременно выполнить комплексный анализ таргетной панели генов и, исходя из полу- ченных результатов, предписывает необходимость интенсификации тера- пии и своевременное применение аллогенной трансплантации гемопоэти- ческих стволовых клеток (алло-ТГСК).

Цель. Оценить возможности использования NGS в диагностике и опре- делении прогностических особенностей течения заболевания у пациентов с ОМЛ.

Материалы и методы. Проведено ретроспективное и проспективное исследование влияния мутационного статуса генов на течение заболева- ния у 33 пациентов с ОМЛ, которым было выполнено секвенирование в де- бюте заболевания перед началом лечения. NGS проводилось на платформе NextSeq (Illumina, США) с использованием NGS-панели зондов к 118 генам. Для оценки влияния мутаций на выживаемость был выполнен регрессион- ный анализ пропорциональных рисков Кокса.

Результаты. В исследуемой группе больных ОМЛ (N=33) медиана возрас- та составила 61 (26–79) год (n=33), соотношение М:Ж было 1 к 2,7. Выявле- но 235 различных мутаций. Наибольшая частота мутаций отмечалась в ге- нах ASXL1 (25%), DNMT3A (20%), PTPN11 (20%), KMT2C (18%), RUNX1 (18%),

RYR1 (18%), SRSF2 (18%) и TET2 (18%).

Анализ сопутствующих и взаимоисключающих выявил достоверную связь между парами мутаций в генах DNMT3A и NPM1 (р = 0,002), FAT1 и PTPN11 (р=0,0226), FAT1 и SRSF2 (р=0,0154), KMT2C и CUX1 (р=0,0349), BRCA2

и RYR1 (р=0,0349), что свидетельствует об их присутствии в одном геноме. Взаимоисключающие мутации были между ASXL1 с NPM1 и IDH2, что отра- жает их участие в альтернативных путях патогенеза ОМЛ.

По результатам однопараметрического регрессионного анализа Кок- са выявлено, что на длительность общей выживаемости статистически значимо влияют мутации генах: BCR, EZH2, KMT2D, MGA и SRSF2. Наиболее неблагоприятное влияние оказали мутации в гене MGA со значением (HR равным 23,17), р=0,002. Мутации в генах SRSF2 (HR=9,98, p=0,003) и BCR (HR=6,61, p=0,001), а также в генах эпигенетической регуляции транскрип- ции – KMT2D (HR=5,09, p=0,021) и EZH2 (HR=7,13, p=0,021) характеризуются неблагоприятным прогнозом.

Выводы. Успешность терапии ОМЛ в наибольшей степени зависит от мутационного статуса пациентов. Разнообразие мутационного статуса предоставляет возможность своевременного назначения таргетных препаратов и проведения алло-ТГСК с целью улучшения показателей ОВ пациентов и их качества жизни.

Л.В. Сандакова, Л.Р. Ахметова, А.Н. Усаева, Р.Р. Магадеева, М.A. Кадирова, Ф.С. Билалов

ЦИТОГЕНЕТИЧЕСКИЙ ПРОФИЛЬ ПАЦИЕНТОВ С ХРОНИЧЕСКИМ МИЕЛОИДНЫМ ЛЕЙКОЗОМ В РЕСПУБЛИКЕ БАШКОРТОСТАН

Государственное бюджетное учреждение здравоохранения

«Республиканский медико-генетический центр», Уфа

Введение. Хронический миелоидный лейкоз (ХМЛ) – клональное ми- елопролиферативное заболевание, особенностью которого является на- личие приобретенной генетической аномалии – «филадельфийской хро- мосомы» (Ph). В большинстве случаев «филадельфийская хромосома» образуется в результате классической реципрокной транслокации между хромосомами 9 и 22 t(9;22)(q34;q11.2), а в некоторых случаях в результате криптической инсерции гена ABL1/9q34 в район гена BCR/22q11.2 с обра- зованием химерного онкогена BCR::ABL1, либо вариантной транслокации с вовлечением хромосомы 22. Дополнительные хромосомные аберрации (ДХА) у пациентов с ХМЛ зачастую являются причиной развития рези- стентности к проводимой терапии ингибиторами тирозинкиназ и в соче- тании с патогенными мутациями приводят к снижению общей выживае- мости пациентов.

Цель. Определить цитогенетический профиль у пациентов с хрониче- ским миелоидным лейкозом в Республике Башкортостан.

Материалы и методы. Диагностику и мониторинг хронического миело- идного лейкоза в Республике Башкортостан проводят с помощью стандарт- ного цитогенетического исследования (СЦИ) клеток костного мозга, в неко- торых случаях в сочетании с молекулярно-цитогенетическим методом FISH, и с помощью молекулярно-генетического исследования периферической кро- ви, при котором определяется экспрессия химерного гена BCR::ABL1 белок р210 методом качественной и количественной ПЦР в реальном времени.

СЦИ проводилось по стандартной методике получения хромосомных препаратов из клеток костного мозга и применения дифференциального GTW-окрашивания хромосом. При СЦИ анализировалось не менее 25 мета- фаз, полученных прямым и культуральным методами. Хромосомные пре- параты исследовали с помощью светового микроскопа фирмы «Zess» Axio Imager.A2 в программе «Ikaros».

Для FISH-исследования применялась суспензия клеток костного мозга, полученная прямым методом. В работе использовались локус-специфичные ДНК– зонды фирмы «Kreatech». Зонд ON BCR/ABL1 t(9;22) Fusion опти- мизирован для детекции реципрокной транслокации t(9;22)(q34;q11.2) по двойному слиянию сигналов, в двух цветах, на метафазных и интерфазных клетках костного мозга. Этот набор выявляет и криптическую инсерцию гена ABL1 в район гена BCR. Зонд ON BCR/ABL t(9;22), DC, S-Fusion, ES приме- няется для первичного скрининга пациентов с ХМЛ.

FISH-анализ проводили согласно протоколу производителя на цитоге- нетических препаратах, содержащих интерфазные ядра и метафазные хро- мосомы. Препараты исследовали с помощью флуоресцентного микроскопа фирмы «Zess» Axio Imager.A2 в программе «Isis». Было проанализировано от 200 до 1000 интерфазных ядер, а в ряде случаев анализ проводился на мета- фазных пластинках. Интерпретация полученных результатов осуществля- лась в соответствии с международной системой цитогеномной номенклату- ры хромосом человека (ISCN,2020, 2024).

Результаты. Нами было обследовано 95 пациентов с диагнозом ХМЛ в различных фазах заболевания за период с 2022 года по 2024 год. Возраст пациентов составил от 24 лет до 84 лет. Доля женщин в исследуемой группе пациентов оказалась больше, чем мужчин и составила 54%. У 73 (76,8%) пациентов выявлена классическая реципрокная транслокация t(9;22) (q34;q11.2). У 11 (11,6%) пациентов выявлена вариантная транслокация с вовлечением хромосомы 22. У 11 (11,6%) пациентов выявлены ДХА. Сре- ди группы пациентов с ДХА у 5 (46%) пациентов выявлен дополнительный дериват хромосомы 22 , у 4 (36%) пациентов был установлен комплексный кариотип с 3 – 5 различными структурными и числовыми хромосомными аберрациями (дериватами хромосом: X, 11, 12, 22; делециями хромосом: 6, 11, 20; трисомиями хромосом: X, 8, 14, 16; транслокациями между хромосомами: 1 и 5, 1 и 11; маркерной хромосомой) , у 1 (9%) пациента выявле- на трисомия хромосомы 8 и у 1 (9%) пациента дополнительно выявлена транслокация между хромосомами 3 и 4.

Выводы. Таким образом, у пациентов с ХМЛ в Республике Башкортостан установлен следующий цитогенетический профиль: у большинства (76,8%) пациентов с хроническим миелоидным лейкозом выявляется классическая реципрокная транслокация t(9;22)(q34;q11.2) как единственное цитогене- тическое событие. Частота встречаемости вариантной транслокации, при- водящей к образованию химерного онкогена BCR::ABL1 составляет 11,6%. У 11,6% пациентов выявляются дополнительные хромосомные аберрации как структурного, так и числового характера, в том числе, и в составе ком- плексного кариотипа, который является крайне неблагоприятным собы- тием в формировании резистентности к проводимой терапии и снижении общей выживаемости пациентов с ХМЛ.

М.В. Сарпова, Е.В. Трегубова, Д.А. Дьяконов, М.А. Логинова, В.А. Росин, Е.В. Ванеева, С.В. Самарина

ПРОГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ СОЧЕТАННЫХ АБЕРРАЦИЙ ГЕНОВ TP53 И CDKN2B У БОЛЬНЫХ ДИФФУЗНОЙ  В-КРУПНОКЛЕТОЧНОЙ  ЛИМФОМОЙ

Федеральное государственное бюджетное учреждение науки «Кировский научно-исследовательский институт гематологии и переливания крови Федерального медико-биологического агентства», г. Киров

Введение. При онкогематологических неоплазиях одними из наиболее часто мутирующих являются гены-супрессоры опухолевого роста ТР53, CDKN2A и/или CDKN2B. Аберрации ТР53 считаются предикторами рефрак- терности к терапии и прогрессии диффузной В-крупноклеточной лимфомы (ДВКЛ). По мнению некоторых исследователей, прогностическое значение делеции локуса 17р13 спорно, утраты генов CDKN2A и/или CDKN2B – про- тиворечиво. Согласно данным литературы, больные ДВКЛ с сочетанными аберрациями генов TP53 и CDKN2A имеют неблагоприятный прогноз. Све- дения о прогностическом значении одновременных нарушений генов TP53 и CDKN2B при данной неоплазии не обнаружены.

Цель. Определить прогностическое значение сочетанных аберраций ге- нов TP53 и CDKN2B у больных ДВКЛ.

Материалы и методы. В ретроспективное исследование включены 85 больных с впервые диагностированной ДВКЛ. Все пациенты получали пер- вую линию терапии по схеме R-CHOP. Мутационный статус гена ТР53 опре- деляли методами секвенирования нового поколения (NGS) в соответствии со стандартными протоколами, предложенными группой исследователей The International Agency for Research on Cancer (IARC). Делецию локуса 17р13 выявляли с помощью анализа флуоресцентной in situ гибридизации (FISH) с использованием ДНК-зондов Kreatech TP53 (17p13) / SE 17 FISH probe. По- иск делеций генов CDKN2B осуществляли методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) в реальном времени с применением специфических прай- меров. Пятилетнюю общую (ОВ) и беспрогрессивную (БПВ) выживаемость рассчитывали по методу Каплана-Мейера (log-rank тест). Риск наступления события вычисляли методом регрессионного анализа Кокса с расчетом от- ношения рисков (ОР) и 95% доверительного интервала (ДИ). Различия меж- ду показателями считали статистически значимыми при p<0,05.

Результаты. Патогенные варианты ТР53 найдены у 17,6% (15/85) паци- ентов с ДВКЛ. Делеция локуса 17р13 обнаружена у 10,6% (9/85) больных.

При этом у 8,2% (7/85) пациентов выявлена биаллельная инактивация ТР53. В целом, аберрации ТР53 (патогенная мутация и/или делеция локуса) определены у 20,0% (17/85) больных. Делеция CDKN2B установлена у 31,8% (27/85) больных. Сочетанные аберрации генов (TP53+/CDKN2В+) обнару- жены у 7,1% (6/85) пациентов, одновременное отсутствие поломок (TP53-/ CDKN2В-) – у 55,3% (47/85). Варианты TP53+/CDKN2В- и TP53-/CDKN2В+ вы-

явлены у 12,9% (11/85) и 24,7% (21/85) больных соответственно. Статисти- чески значимые межгрупповые различия показателей ОВ и БПВ определе- ны у пациентов с одновременным наличием аберраций (TP53+/CDKN2B+) и без генетических нарушений (TP53-/CDKN2B-). Пятилетние ОВ и БПВ значи- тельно ниже у больных с наличием сочетанных аберраций TP53+/CDKN2B+ (16,7%, медиана 12 мес. и 16,7%, медиана 5 мес. соответственно) по срав- нению с таковыми показателями у пациентов без генетических нарушений (68,1% и 61,7% соответственно, медианы не достигнуты), р=0,004 и р=0,009. Риск летального исхода выше в 3,8 раза, прогрессии – в 3,1 раза, у больных, в биологических образцах которых обнаружена комбинация TP53+/CDKN2B+, по сравнению с пациентами, имевшими другие варианты поломок генов (р=0,007; ОР=3,81; 95% ДИ=1,44-10,03 и р=0,019; ОР=3,12; 95% ДИ=1,21-8,06 соответственно).

Выводы. Сочетание аберраций генов TP53 и CDKN2В ассоциировано с низкими показателями ОВ и БПВ больных ДВКЛ, возрастанием риска не- благоприятного исхода и прогрессии заболевания в 3,8 и в 3,1 раза соответ- ственно. Для подтверждения полученных данных необходимы дальнейшие исследования.

Н.А. Северина, Ю.В. Сидорова, Б.В. Бидерман, М.А. Костормина, Э.А. Анненкова, Т.Н. Обухова, Ю.А. Чабаева, Д.К. Бессмертный, И.А. Лукьянова, А.Б. Судариков

СРАВНИТЕЛЬНЫЙ АНАЛИЗ МЕТОДОВ ВЫСОКОПРОИЗВОДИТЕЛЬНОГО  СЕКВЕНИРОВАНИЯ И ПЦР С ФРАГМЕНТНЫМ АНАЛИЗОМ ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ МУТАЦИЙ ГЕНА FLT3 У ПАЦИЕНТОВ С ОСТРЫМ МИЕЛОИДНЫМ ЛЕЙКОЗОМ

ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр гематологии» Минздрава России, Москва

Введение. Мутации гена FLT3, в том числе внутренние тандемные дупли- кации (FLT3-ITD) и точечные мутации тирозинкиназного домена (FLT3-TKD), являются значимыми молекулярными событиями при остром миелоидном лейкозе (ОМЛ). FLT3-ITD ассоциированы с промежуточным и неблагоприят- ным прогнозом при высоком аллельном отношении (АО). Важной задачей представляется сравнить эффективность различных методов молекуляр- но-генетической диагностики для выявления мутаций в гене FLT3.

Цель исследования. Сравнить эффективность методов ПЦР-фрагмент- ного анализа (ФА) и высокопроизводительного секвенирования (ВПС) для выявления мутаций FLT3-ITD. Проанализировать спектр выявляемых то- чечных FLT3-TKD мутаций при исследовании методом ВПС. Оценить ассоци- ацию различных мутаций FLT3-ITD с выживаемостью пациентов.

Материалы и методы. В исследование включено 178 FLT3-ITD-поло- жительных и 20 FLT3-ITD-отрицательных больных ОМЛ, проходивших ди- агностику или лечение в ФГБУ «НМИЦ гематологии» в период с 2021 по 2024 гг. Молекулярно-генетический анализ FLT3-ITD проводился методами ПЦР-ФА (Нанофор 05, ИАП РАН, Россия) и ВПС на платформе MiSeq (Illumina, США). У 148 пациентов исследованы 16, 17 и 20 экзоны FLT3-TKD-области методом ВПС. Поиск нуклеотидных замен и инсерций/делеций гена FLT3 выполнялся с использованием программного обеспечения VarDict. Статистическая оценка включала критерий Фишера и анализ выживаемости по Каплан-Майеру.

Результаты. Мутации FLT3-ITD были обнаружены у 177 из 178 (99%) пациентов методом ФА и ВПС, у 1 пациента ВПС не выявил вставки. У 95 из 177 пациентов (53,7%) число выявленных вставок совпадало при сравне- нии ПЦР-ФА и ВПС. В 66 из 177 случаев (37,3%) число вставок было больше при ФА, в 15 из 177 (8,5%) — больше при ВПС. Длина вставок совпадала с точностью до 6 пар оснований (п.о.) при исследовании обоими методами дупликаций длиной до 90 п.о. Максимальная длина дупликации, определён- ная методом ВПС, составила 234 п.о., минимальная — 3 п.о. Медиана аллель- ной частоты (АЧ) по ФА составила 20% (диапазон: 1–95%), по ВПС — 12% (диапазон: 0,7–89%). Максимальное число ITD у одного пациента состави- ло 11 при ФА и 4 при ВПС. У 20 пациентов ВПС проводилось повторно: во всех случаях локализация и последовательность вставки совпадали. В кон- трольной группе пациентов без FLT3-ITD (по данным ФА) не было выявлено дупликаций методом ВПС. У 19/177 пациентов (10,7%) обнаружены встав- ки, локализованные в интронной области, у 11/177 пациентов (6,2%) — в каноническом сайте сплайсинга, вносящие существенный вклад в оценку аллельной нагрузки, среднее значение АЧ=27%. Ассоциация этих вариантов с прогнозом требует дальнейшего изучения. При анализе выживаемости у пациентов с нормальным кариотипом выявлена ассоциации FLT3-ITD, при- ходящихся на область TKD (после 610 аминокислотной позиции), с более короткой безрецидивной выживаемостью (p = 0,05). Достоверной связи ло- кализации вставок или их числа с общей и безрецидивной выживаемостью не выявлено. Но у пациентов с несколькими вставками (более 1 по данным ФА) чаще наблюдалась смена доминирующего клона или появление нового (у 8 из 14 (57%) против 3 из 12 (25%), p = 0,05) в рецидиве. Точечные онко- генные мутации FLT3-TKD были выявлены у 28 из 148 пациентов (17,5%), 23 из 28 (82%) отличные от p.D835Y. У 14 из 26 пациентов (53,8%) мутация FLT3-TKD сочеталась с FLT3-ITD.

Выводы. ФА остаётся надежным быстрым методом первичной оценки FLT3-ITD. ВПС обеспечивает более полную характеристику мутационного ландшафта, включая точную локализацию дупликации, выявляет дополни- тельные точечные FLT3-TKD мутации. Оба метода обладают своими ограни- чениями, их комплексное применение позволяет достоверно оценивать му- тационный статус гена FLT3 при ОМЛ, что важно для выбора оптимальной терапевтической тактики.

С.Э. Старченко1, Д.К. Бессмертный1, Н.В. Рисинская1, Ю.А. Чабаева1, В.А. Суримова1, С.М. Куликов1, А.С. Пономарева2, И.В. Канивец2, С.А. Коростелев2, З.Т. Фидарова1, А.И. Кашлакова1, И.А. Лукьянова1, В.В. Троицкая1, А.Б. Судариков1, Е.Н. Паровичникова1

АССОЦИАЦИЯ КОПИЙНО-НЕЙТРАЛЬНОЙ ПОТЕРИ ГЕТЕРОЗИГОТНОСТИ (CN-LOH) ГЕНА KITLG С БОЛЕЕ НИЗКОЙ ЧАСТОТОЙ ДОСТИЖЕНИЯ РЕМИССИИ У ПАЦИЕНТОВ С ОСТРЫМ МИЕЛОИДНЫМ ЛЕЙКОЗОМ

1Национальный медицинский исследовательский центр гематологии, Москва

2Лаборатория молекулярной патологии «Геномед», Москва

Введение: в соответствии с рекомендациями Европейской сети по изуче- нию лейкозов 2022г (ELN-2022), пациенты с острым миелоидным лейкозом (ОМЛ) в зависимости от их цитогенетического и молекулярного профиля стратифицируются на три группы риска. Различие ответов на терапию у пациентов группы промежуточного риска делает актуальным поиск новых молекулярных предикторов. Наша цель заключалась в изучении числовых нарушений копийности (CNA) и копийно-нейтральной потери гетерозигот- ности (cn-LOH) генов, которые могут быть ассоциированы с ответом на те- рапию. Некоторые из этих аберраций могут быть не связаны с опухолевым клоном, а носить постзиготический или герминальный характер. Однако трудности, связанные со сбором контрольных материалов, таких как некроветворные ткани, костный мозг или кровь пациента в стадии ремиссии, заставили нас обратиться к контрольной группе здоровых доноров. Это по- зволило нам оценить популяционную частоту встречаемости CNAs, которые не связаны с ОМЛ.

Цель: Определить наиболее значимые молекулярные аберрации, обна- руженные методом ХМА, которые ассоциированы с пониженной вероят- ностью достижения ремиссии у пациентов с ОМЛ группы промежуточного риска.

Материалы и методы: В исследование включены 34 пациента с ОМЛ, по- лучавшие лечение в Национальном медицинском исследовательском центре гематологии с 2017 по 2022 годы. Все пациенты относились к группе про- межуточного риска согласно классификации ELN-2022. Медиана возраста составила 41 год (19–62); 23 (67,7%) женщины и 11 (32,3%) мужчин. У боль- шинства пациентов (29/34) был нормальный кариотип. У двух пациентов кариотип не относился к благоприятной или неблагоприятной группе, а в 4 случаях кариотип не удалось определить из-за отсутствия митозов, хотя метод FISH исключил неблагоприятные аберрации. Мутации FLT3-ITD были обнаружены у 13/34 (38%) пациентов. Почти все пациенты получили стан- дартный курс индукционной терапии «7+3», за исключением двух пациентов с низким показателем ECOG, которым был назначен менее интенсивный курс. Пациентам с мутацией FLT3-ITD (кроме одного с коморбидностью) добавлен мидостаурин. ХМА проводили на ДНК, выделенной из образцов костного мозга в дебюте заболевания. Исследование выполнялось с исполь- зованием оборудования Thermo Fisher Scientific и микроматрицы CytoScan™ HT-CMA. Группу сравнения составили 100 здоровых доноров (медиана воз- раста 34 года (10–49)), проходивших генетическое консультирование в компании «Геномед» (47% женщин, 53% мужчин). ХМА выполнен на ДНК, выделенной из периферической крови. Первичная обработка данных выпол- нялась с использованием Chromosome Analysis Suite 4.5.0.34. Для подготов- ки данных к статистическому анализу использовался Python 3.12.4 в среде Jupyter Notebook (https://jupyter.org/), а сам анализ проводился в системе SAS 9.4. Для частотного анализа 26 000 генов при ограниченном размере выбор- ки пациентов (n=34) использовали точный критерий Фишера с порогом зна- чимости p<0,001, учитывающим поправку на множественные сравнения.

Результаты: Наиболее часто встречающиеся CNA у пациентов: делеция FGFR3 (56%), увеличение копийности KMT2A (15%) и cn-LOH локуса 3p24.3. Однако наиболее значимая ассоциация с частотой достижения ремиссии была обнаружена для cn-LOH в локусе 12q21.32, включающем ген KITLG. Данная аберрация была обнаружена у 9 из 34 пациентов (26,5%). Полной ремиссии достигли только 2 из 9 пациентов (один без мутаций, один с мутацией FLT3-ITD). Из 7 пациентов, не ответивших на лечение, только у 3 была мутация FLT3-ITD. Статистический анализ показал, что cn-LOH гена KITLG значимо ассоциирована с низкой частотой достижения ремиссии (ОШ=0,02, 95% ДИ= (0,003-0,21), p < 0,001). В группе сравнения cn-LOH обнаружена у 24% здоровых доноров (24/100), что близко к частоте данной аберрации у пациентов с ОМЛ.

Выводы: cn-LOH гена KITLG, кодирующего лиганд рецептора KIT, ассоци- ирована с недостаточным ответом на терапию у пациентов с ОМЛ. Однако, учитывая сходную частоту данного события у здоровых доноров, оно (cn- LOH), вероятно, не является патогенным само по себе. В контексте ОМЛ cn- LOH 12q21.32, включающая KITLG, может выступать потенциальным марке- ром резистентности к лечению. Для установления природы этой аберрации в дальнейшем необходимо проведение ХМА парных образцов опухолевой и здоровой ткани пациентов.

Благодарности: Исследование выполнено при поддержке Национально- го гематологического общества (Москва).

В.А. Суримова, Н.В. Рисинская, Е.С. Котова, П.Ш. Абдулпатахов, А.Н. Васильева, Ю.А. Чабаева, С.Э. Старченко, С.М. Куликов, О.А. Алешина, А.Б. Судариков, Е.Н. Паровичникова

ПРИМЕНЕНИЕ МЕТОДОВ МАШИННОГО ОБУЧЕНИЯ ДЛЯ ОЦЕНКИ ПРОГНОСТИЧЕСКОЙ ЗНАЧИМОСТИ МОЛЕКУЛЯРНЫХ АБЕРРАЦИЙ У ПАЦИЕНТОВ С ОСТРЫМ ЛИМФОБЛАСТНЫМ ЛЕЙКОЗОМ

Национальный медицинский исследовательский центр гематологии, Москва

Введение: Метод хромосомного микроматричного анализа позволя- ет проанализировать геном и выявить множество микроделеций, микро- дупликаций и участков копийно-нейтральной потери гетерозиготности (cn-LOH) у пациентов со злокачественными новообразованиями системы крови. Классические методы статистического анализа не всегда могут эф- фективно работать с таким большим объемом данных, что требует при- менения методов машинного обучения. Выполнение полноценного стати- стического анализа полученных результатов ХМА у взрослых пациентов с острым лимфобластным лейкозом (ОЛЛ) может позволить выявить новые прогностические факторы.

Цель: С помощью методов машинного обучения определить молекуляр- ные аберрации, ассоциированные с меньшей вероятностью достижения ремиссии у пациентов с Ph-негативным ОЛЛ, среди молекулярных аберраций, обнаруженных методом ХМА.

Материалы и методы: В исследование включены 84 пациента с de novo диагностированным ОЛЛ, получавших лечение по протоколу ОЛЛ- 2016/ОЛЛ-2016m в ФГБУ "Национальный медицинский исследователь- ский центр гематологии" Минздрава России с 2017 по 2024гг. Медиана возраста – 31 год (18–71), мужчины : женщины = 51 : 33. ХМА проводили на ДНК, выделенной из образцов костного мозга в дебюте заболевания, с использованием оборудования Thermo Fisher Scientific и микроматри- цы CytoScan™ HT-CMA. Для первичной обработки данных использовали Chromosome Analysis Suite 4.5.0.34. Предобработка и статистический ана- лиз данных проводили с использованием Python 3.12.4 в среде Jupyter Notebook (https://jupyter.org/). Для частотного анализа 19850 генов при ограниченном размере выборки пациентов (n=84) использовали точный критерий Фишера с порогом значимости p <0,001, учитывающим поправ- ку на множественные сравнения. Метод случайного леса использовался с числом деревьев n = 1000, отношение обучающей выборки к тестовой составляло 80/20.

Результаты: По итогам анализа с применением критерия Фишера фак- торами, ассоциированными с недостижением ремиссии, были аберрации с вовлечением следующих генов: копийно-нейтральная потеря гетерозигот- ности (cn-LOH) гена MYBL1 (p = 0.000035), cn-LOH гена CFL2 (p = 0.000293), дупликация CAPN2 (p = 0.000293). Благоприятным фактором была cn-LOH гена CHRNA6 (p = 0.00017).

Для более комплексной оценки значимости аберраций с учётом слож- ных зависимостей и большого признакового пространства был использо- ван метод случайного леса. В результирующую модель с наибольшим весом (variable importance) вошли следующие гены (от наиболее важных к наиме- нее): MYBL1, SLC19A3, CAPN2, CFL2, CHRNA6, PLA2G3, NLRP7, MIR4445.

MYBL1 — ген, кодирующий транскрипционный фактор, важный для регуляции клеточного цикла и дифференцировки клеток. Нарушения в гене MYBL1 ассоциирован с развитием различных типов лейкемии. Гены SLC19A3, CAPN2, CFL2, CHRNA6, PLA2G3, NLRP7, MIR4445 тем или иным образом участвуют в регуляции процессов клеточного цикла и дифференциров- ки клеток и могут представлять интерес при изучении патогенеза острых лейкозов.

Выводы: В результате применения классических методов статистиче- ского анализа и методов машинного обучения найдены новые возможные предикторы ответа на терапию у пациентов ОЛЛ (cn-LOH гена MYBL1, cn- LOH гена CFL2, дупликация CAPN2, cn-LOH гена CHRNA6, делеция SLC19A3). 

Для установления герминальной либо соматической природы этих аберра- ций в дальнейшем необходимо проведение ХМА парных образцов опухоле- вой и здоровой ткани пациентов.

Благодарности: Исследование выполнено при поддержке Российско- го научного фонда (РНФ), проект № 23-25-00490. URL: www.rscf.ru/en/ project/23-25-00490/

Е.В. Трегубова, Н.В. Исаева, Е.Л. Назарова

ВЗАИМОСВЯЗЬ МУТАЦИОННОГО СТАТУСА ГЕНА SF3B1 С ИММУНОФЕНОТИПИЧЕСКИМИ ПОКАЗАТЕЛЯМИ ОПУХОЛЕВЫХ КЛЕТОК ПРИ ХРОНИЧЕСКОМ ЛИМФОЦИТАРНОМ ЛЕЙКОЗЕ

Федеральное государственное бюджетное учреждение науки «Кировский научно-исследовательский институт гематологии и переливания крови Федерального медико-биологического агентства», г. Киров

Введение. Известно, что субклональные драйверные мутации гена SF3B1 являются независимым фактором риска быстрого прогрессирования хронического лимфоцитарного лейкоза (ХЛЛ). Среди прогностических им- мунофенотипических показателей при ХЛЛ хорошо изученными являются CD38, CD49d и ZAP70. Критерием неблагоприятного прогноза заболевания считается, если на более чем 30 % лейкозных клеток экспрессируются CD38 и/или CD49d, либо на более, чем 20 % – ZAP70. Поиск взаимосвязи молеку- лярно-генетических маркеров с иммунофенотипическими характеристика- ми клеток ХЛЛ являются перспективными для прогнозирования характера течения в дебюте патологического процесса.

Цель. Оценить взаимосвязь мутаций гена SF3B1 с иммунофенотипиче- скими особенностями опухолевых клеток у больных хроническим лимфо- цитарным лейкозом.

Материалы и методы. Проанализировано 77 образцов биологическо- го материала (периферической крови и костного мозга) больных ХЛЛ, на- блюдавшихся в ФГБУН КНИИГиПК ФМБА России в период с 2018 по 2024 гг. Из них 42 (54,5 %) мужчины и 35 (45,5 %) женщин. Медиана возраста в дебюте заболевания составила 64 (min-max: 41-86) года. Мутационный ста- тус гена SF3B1 (14-16 экзоны) оценивался методом прямого секвенирова- ния по Сэнгеру. Иммунофенотипирование В-лимфоцитов выполнялось ме- тодом лазерной проточной цитофлуориметрии с использованием панели моноклональных антител, подобранных в соответствии с требованиями Международной рабочей группы по ХЛЛ (International Working Group on CLL – IwCLL) и отечественных клинических рекомендаций. Статистическая обработка результатов исследования осуществлялась с использованием не- параметрических методов анализа. Различия считались статистически зна- чимыми при p <0,05.

Результаты. Патогенные варианты SF3B1 обнаружены у 7 (9,1 %) боль- ных ХЛЛ. При сопоставлении мутационного статуса гена SF3B1 с иммуно- фенотипическими характеристиками клеток опухолевого клона выявлена его ассоциация с количеством CD22+ клеток в регионе В-лимфоцитов (p = 0,038). Установлено, что при наличии мутаций SF3B1 доля CD22+ клеток статистически значимо ниже, чем у пациентов без SF3B1-аберраций (меди- ана 27,2 % vs. 56,9 % соответственно). С помощью ROC-анализа установлено пороговое значение экспрессии CD22, при котором прогнозируется обнару- жение SF3B1-мутаций. Порог составил 41,2 % (AUC: 0,755 ± 0,075; 95 % ДИ: 0,609-0,902, р = 0,04). При разделении пациентов на группы с высокой и низ- кой экспрессией CD22 относительно выявленного значения найдено, что у пациентов с CD22 ≤ 41,2 % шанс обнаружения патогенных вариантов гена SF3B1 в 8 раз выше, чем в группе с CD22> 41,2 % (p=0,041, 95 % ДИ: 0,92- 75,65). Для оценки временных характеристик течения заболевания, в част- ности времени до начала терапии, обнаружено, что пациенты с мутациями SF3B1 и с уровнем экспрессии CD22 ≤ 41,2 % имеют значимо более короткий период до инициации терапии (медиана 50 месяцев), чем с CD22> 41,2% (ме- диана периода до начала терапии не достигнута) (р = 0,032).

Выводы. Мутированный статус гена SF3B1 у больных ХЛЛ ассоциирован с низкой экспрессией антигена CD22. При наличии SF3B1-аберраций и уров- ня экспрессии CD22+-клеток менее 41,2 % период до инициации терапии значительно короче, чем при высоком уровне поверхностной экспрессии CD22.

Д.А. Чебыкина, Н.Ю. Семенова, Е.В. Мотыко, А.Н. Кириенко, Д.В. Кустова, А.Д. Гарифуллин, С.В. Сидоркевич, И.С. Мартынкевич

АНАЛИЗ МОЛЕКУЛЯРНОГО ПРОФИЛЯ ПАЦИЕНТОВ  С МНОЖЕСТВЕННОЙ МИЕЛОМОЙ МЕТОДОМ СЕКВЕНИРОВАНИЯ СЛЕДУЮЩЕГО ПОКОЛЕНИЯ

ФГБУ «Российский научно-исследовательский институт гематологии и трансфузиологии ФМБА России», Санкт-Петербург

Введение. За последние 20 лет отмечено значительное расширение ар- сенала диагностических методов и внедрение инновационных подходов к анализу генома и транскриптома опухолевых клеток. Идентификация му- таций методом секвенирования следующего поколения (NGS), способству- ющих прогрессии множественной миеломы (ММ) и возникновению лекар- ственной резистентности, создает конкретные «мишени» для таргетной терапии. Значимые достижения в диагностике и выборе терапевтической тактики при ММ дали возможность существенно повысить показатели вы- живаемости, однако исключить ММ из списка неизлечимых заболеваний на сегодняшний день невозможно.

Цель. Рассмотреть прогностическую значимость мутаций генов у паци- ентов с ММ с применением NGS-анализа.

Материалы и методы. Проведено исследование у 45 пациентов с ММ медианой возраста 59 (51–68) лет. Медиана наблюдения составила 29,8 месяцев с максимальным периодом наблюдения 13 лет. Всем пациентам проведен мутационный скрининг с использованием NGS-панели зондов к 118 генам на платформе NextSeq Illumina методом парно-концевого чтения. Анализ данных выполнен на языке статистического программи- рования R v4.2.2. Сравнение данных категориальных переменных произ- водилось методом хи-квадрат. Анализ выживаемости выполнен методом Каплана-Мейера, различия в группах оценивались методом Лог-Ранг. Для определения прогностической значимости всех найденных мутаций у каждого пациента была рассчитана опухолевая мутационная нагрузка (ТМВ), которая определялась как количество мутаций на 1 мегабазу (Mb) кодирующей последовательности. Медиана TMB равнялась 5,0 мутаций/ Мb.

Результаты. Среди пациентов преобладали больные, относящиеся к III стадии по системе B. Durie, S. Salmon – 68,8 % группе высокого цитогенети- ческого риска согласно классификации mSMART3.0 были отнесены 20,0% больных. Медиана значения М-компонента была 31,6 г/л (0,7–53,6). У боль- шинства пациентов значение ЛДГ соответствовало референтному интервалу – от 69 до 438 Ед/л, а уровень бета2 чаще превышал верхнюю границу нормы (ВГН): медиана составила 4,12 мг/л (0,69-15).

При проведении NGS было выявлено 484 аллельных варианта, мутиро- вано 57 из 118 исследуемых генов. Медиана VAF составила 45,91% (10,0– 50,38), медиана TMB – 5,0 мутаций/Мb. Проведенный анализ в отношении 2-летней БСВ в зависимости от величины ТМВ (≤ 5 мутаций/Mb и > 5 мута- ций/Mb) продемонстрировал достоверные различия в группах: у пациентов с высокой ТМВ (> 5) 2-летняя БСВ составила 69,6% (95% ДИ 50,3–96,5), у больных с низкой ТМВ (≤ 5) – 95,0% (95% ДИ 85,9–100), p = 0,046. С другой стороны, при проведении анализа БСВ для количественных переменных (в нашем случае значение ТМВ для каждого пациента) точка отсечения соста- вила 6,63 мутации/Mb, которая также продемонстрировала прогностиче- скую значимость ТМВ у пациентов с ММ. Трехлетняя БСВ в группе с высокой TMB (≥ 6,63) составила 42,8% (95% ДИ:22,6–81,0), у пациентов с низкой ТМВ (< 6,63) –76,7%,(95% ДИ:22,6–81,0), р = 0,041.

Наличие патогенных мутаций является неблагоприятным прогностиче- ским параметром: 1-летняя (медиана наблюдения 12,9 месяцев) БСВ у па- циентов с патогенными мутациями составила 66,7% (95% ДИ 42,0–100,0), 2-летняя БСВ у больных без патогенных мутаций – 88,2% (95% ДИ 76,3– 100,0), p = 0,078. Наибольшая частота мутаций отмечалась в генах: KMT2C (31%), KMT2D (18%), APC (15%), RYR1 (15%), DNMT3A (13%), BCR (13%), MGA (13%), ARID1A (13%), FAT1 (10%) ATM (8%). Среди всех выявленных мута- ций, неблагоприятное влияние на течение ММ оказывали мутации в генах FAT1, NRAS и ATM. При анализе выживаемости 3-летняя ОВ у пациентов с мутацией FAT1 составила 36.5% (95% ДИ 8,4–100,0), в группе дикого типа – 76,6% (61,6–97,7), р = 0,0039. У пациентов с мутацией гена NRAS 3-летняя ОВ составила 50,0% (95% ДИ 12,5–100), в группе дикого типа – 73,8%, р = 0,0043. А для пациентов с мутацией гена ATM 5-летняя ОВ составила 33,6% (95% ДИ 6,7–100,0) и была значимо ниже, чем в группе дикого типа – 76,9%, р < 0,0001.

Выводы. Установлено, что высокая опухолевая мутационная нагрузка является неблагоприятным фактором молекулярного риска ММ, а наличие хотя бы одной патогенной мутации ухудшает прогноз у больных с ММ. Му- тации в генах FAT1, NRAS и ATM оказали неблагоприятное влияние на выжи- ваемость пациентов с ММ.

А.А. Чулкова, А.В. Кохно, В.Н. Двирнык, Т.Н. Обухова, Б.В. Бидерман, Ю.А. Чабаева, И.Н. Наумова, Е.Н. Паровичникова

МИЕЛОДИСПЛАСТИЧЕСКИЙ СИНДРОМ С КОЛЬЦЕВЫМИ  СИДЕРОБЛАСТАМИ, МИЕЛОДИСПЛАСТИЧЕСКОЕ/ МИЕЛОПРОЛИФЕРАТИВНОЕ НОВООБРАЗОВАНИЕ С КОЛЬЦЕВЫМИ СИДЕРОБЛАСТАМИ И ТРОМБОЦИТОЗОМ: ЦИТОГЕНЕТИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ И ВЫЯВЛЯЕМОСТЬ МУТАЦИИ ГЕНА SF3B1

Федеральное государственное бюджетное учреждение «Национальный медицинский исследовательский центр гематологии» Министерства здравоохранения Российской Федерации, г. Москва

Введение. Миелодиспластический синдром с кольцевыми сидеробла- стами (МДС-КС), миелодиспластическое/миелопролиферативное новоо- бразование с кольцевыми сидеробластами и тромбоцитозом (МДС/МПН- КС-Т) имеют общий патогномоничный критерий – наличие в костном мозге ≥15% кольцевых сидеробластов, либо ≥5% при обнаружении мутаций гена SF3B1. Эти мутации, по данным литературы, выявляются в 70-90% случаев установленных МДС-КС с линейной дисплазией (МДС-КС-ЛД), 30-70% слу- чаев МДС-КС с мультилинейной дисплазией (МДС-КС-МД) и 60-90% случаев МДС/МПН-КС-Т. В классификации ВОЗ 2022 молекулярная диагностика вы- ходит на передний план, и обнаружение мутации гена SF3B1 дает основание для установления диагнозов МДС с низкими бластами и мутацией в гене SF3B1, МДС/МПН с мутацией в гене SF3B1 и тромбоцитозом. Предполага- ется, что формулировка диагнозов «с мутацией в гене SF3B1» сохраняется даже в случае отсутствия молекулярных данных, при наличии >15% коль- цевых сидеробластов.

Цель – определение цитогенетических особенностей и встречаемости мутаций гена SF3B1 у пациентов с МДС-КС и МДС/МПН-КС-Т.

Материалы и методы. В исследование включено 158 пациентов, из них с верифицированным диагнозом МДС-КС-ЛД – 26, МДС-КС-МД – 110, МДС/ МПН-КС-Т – 22. Возрастной диапазон – 22-89 лет (медиана – 65 лет), соотно- шение мужчины: женщины – 1,2:1. Стандартное цитогенетическое исследо- вание (СЦИ) было выполнено всем пациентам. Молекулярно-генетическое исследование мутаций в гене SF3B1 было проведено у 76 пациентов.

Результаты. По результатам стандартного цитогенетического исследо- вания нормальный кариотип был выявлен у 107 (67,7%) пациентов: у 22 из 26 (84,6%) пациентов с МДС-КС-ЛД, 66 из 110 (60,0%) пациентов с МДС-КС-МД, 19 из 22 (86,4%) пациентов с МДС/МПН-КС-Т. Аномалии кариотипа статистически значимо чаще определяли при МДС-КС-МД по сравнению с другими группами (р-0,008). Среди 38 пациентов с некомплексным карио- типом наиболее распространенные аберрации были следующие: трисомия хромосомы 8 – у 13 (34,2%), del(20q) – у 7 (18,4%), del(11q) – у 5 (13,2%), потеря Y-хромосомы – у 4 (10,5%), трисомия хромосомы 14 – у 3 (7,9%) паци- ентов. Комплексный кариотип (≥3 аномалий) был отмечен только при МДС- КС-МД, где на его долю пришлось 11,2% (13 человек).

Из 76 пациентов, обследованных на наличие мутаций в гене SF3B1, они были выявлены у 49 человек, что в среднем составило 64,5%. Частота встре- чаемости мутаций в сравниваемых группах составила: МДС-КС-ЛД – 11 из 15 (73,3%), МДС-КС-МД – 33 из 55 (60,0%), МДС/МПН-КС-Т – 5 из 6 (83,3%) (р-0,38).

Выводы. Согласно полученным данным, цитогенетические аномалии определяли значимо чаще при МДС-КС-МД; к этой же группе относятся все выявленные случаи комплексного кариотипа. В исследуемых группах наи- более частыми цитогенетическими аномалиями в некомплексном кариоти- пе оказались трисомия хромосомы 8, del(20q), del(11q), потеря Y-хромосомы, трисомия хромосомы 14. Доля случаев с диким типом гена SF3B1 составила 35,5%, что указывает на актуальность проведения молекулярно-генетиче- ского исследования для определения варианта МДС.

А.А. Шалёва1,2, Ю.Б. Самойлова1, Т.Н. Субботина1,2

ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ГЕТЕРОДУПЛЕКСНОГО АНАЛИЗА ДЛЯ СКРИНИНГА МУТАЦИЙ В ГЕНАХ, АССОЦИИРОВАННЫХ С ОНКОГЕМАТОЛОГИЧЕСКИМИ ЗАБОЛЕВАНИЯМИ

1Сибирский Федеральный Университет, Красноярск

2Федеральное государственное бюджетное учреждение «Федеральный Сибирский Научно-Клинический Центр Федерального Медико-Биологического Агентства», Красноярск

Введение. Соматические мутации по типу небольших делеций и ин- серций возникают при разных видах онкогематологических заболеваний. Такие мутации могут быть как драйверными, так и прогностическими. Например, при истинной полицитемии (ИП) могут возникать драйвер- ные мутации в генах JAK2 и CALR, а при остром миелоидном лейкозе (ОМЛ) возможно появление прогностически значимых мутаций в гене NPM1. При этом особенностью мутаций в данных генах является то, что это может быть большое количество разнообразных мутаций на определенном участке гена (12 экзон в JAK2, 9 экзон в CALR, 12 экзон в NPM1), в связи с чем для анализа таких мутаций оптимальным методом является секве- нирование по Сенгеру. Однако у секвенирования имеется ограничение в виде необходимой аллельной нагрузки мутации не менее 25%, кроме того, это достаточно дорогостоящий метод. В связи с этим актуально использо- вание предварительного скринингового теста, более бюджетного и более быстрого. В качестве такого теста мы предлагаем использовать гетероду- плексный анализ.

Цель. Показать возможность использования гетеродуплексного анализа для скрининга мутаций в генах онкогематологических заболеваний на при- мере 12 экзона гена JAK2, 9 экзона гена CALR, 12 экзона гена NPM1.

Материалы и методы. Предварительно все образцы ДНК с мутациями в 12 экзоне гена JAK2 и в 9 экзоне гена CALR и от пациентов с ИП были проана- лизированы с помощью пиросеквенирования и секвенирования по Сенгеру. Все образцы ДНК с мутациями в 12 экзоне гена NPM1 от пациентов с ОМЛ также предварительно были проанализированы с помощью фрагментно- го анализа. Анализ мутаций в 12 экзоне гена JAK2, в 9 экзоне гена CALR и в 12 экзоне гена NPM1 проводился методом гетеродуплексного анализа: ПЦР проводились с дополнительным этапом денатурации и ренатурации в кон- це для формирования гетеродуплексов, продукты ПЦР анализировались с помощью электрофореза в ПААГ.

Результаты. Мутации в 12 экзоне гена JAK2 выявлены у 11 образцов (делеции 3 или 6 нуклеотидов); мутации в 9 экзоне гена CALR выявлены у 17 образцов (вставки 5 нуклеотидов, делеции 3, 9, 22, 31 или 52 нуклео- тидов). Для 12 экзона JAK2 и 9 экзона CALR все результаты гетеродуплекс- ного анализа совпали с результатами пиросеквенирования и секвениро- вания по Сенгеру. Среди выявленных мутаций CALR аллельные нагрузки составили от 9% до 70%, среди мутаций JAK2 – от 8% до 55%. Мутации в 12 экзоне гена NPM1 выявлены у 34 образцов (вставки 4 нуклеотидов). Для 12 экзона гена NPM1 гетеродуплексный анализ позволил выявить мутации в 33 образцах из 34, поскольку у 1 образца с мутацией аллель- ная нагрузка составила 3% (выявлено фрагментным анализом), что, оче- видно, оказалось ниже порога чувствительности гетеродуплексного ана- лиза. Среди выявленных мутаций 12 экзона NPM1 аллельные нагрузки составили от 22% до 48% для 33 образцов и для 1 образца аллельная на- грузка, как отмечено выше, составила 3%. Нами также были проведены исследования чувствительности гетеродуплексного анализа для различ- ных мутаций 12 экзона JAK2 и 9 экзона CALR, порог чувствительности для них составил 6%. Для определения чувствительности гетеродуплексного анализа для скрининга мутаций 12 экзона NPM1 требуются дальнейшие исследования.

Выводы. По результатам проведенных исследований мы можем реко- мендовать гетеродуплексный анализ как метод недорогого и быстрого скрининга мутаций для использования лабораториями, занимающихся изу- чением мутаций в различных генах, ассоциированных с онкогематологиче- скими заболеваниями, а также лабораториями, не имеющими возможности для проведения секвенирования.

П.Г. Широких, А.Н. Кириенко, Д.В. Кустова, Е.В. Мотыко, И.С. Мартынкевич

ВЛИЯНИЕ ПАТОГЕННЫХ МУТАЦИЙ, ХРОМОСОМНЫХ АБЕРРАЦИЙ И ТЕРАПИИ НА ВЫЖИВАЕМОСТЬ ПАЦИЕНТОВ С ХРОНИЧЕСКИМ ЛИМФОЛЕЙКОЗОМ

ФГБУ «Российский научно-исследовательский институт гематологии и трансфузиологии Федерального медико-биологического агентства», Санкт-Петербург

Введение. Хронический лимфолейкоз (ХЛЛ) – злокачественное заболе- вание лимфоидной системы, характеризующееся значительной клиниче- ской и молекулярной гетерогенностью. Прогноз пациентов определяется генетическими маркерами, такими как мутационный статус генов имму- ноглобулинов (IGHV), патогенные мутации (TP53, NOTCH1, SF3B1), а также хромосомные аберрации (del(17p), del(11q), del(13q)). Кластеризация паци- ентов на основе этих генетических факторов может стать эффективным ин- струментом для прогнозирования выживаемости и выбора персональной терапии для пациентов с ХЛЛ.

Цель. Оценить влияние комбинации IGHV-статуса, патогенных мутаций и хромосомных аберраций на общую выживаемость (OВ) пациентов с ХЛЛ с учетом проводимой терапии, провести кластеризацию пациентов на основе различных генетических факторов.

Материалы и методы. Исследовано 66 пациентов с ХЛЛ (41 мужчина, 25 женщин, возрастная медиана 68 лет). Всем пациентам проведено определение IGHV-статуса методом секвенирования по Сэнгеру, NGS исследование мутаций в генах TP53, NOTCH1, SF3B1 и анализ хромосомных аберраций (del(17p), del(11q), del(13q),+12) методом флуоресцентной гибридизации in situ. Статистический анализ включал метод Каплана-Мейера с лог-ранковым тестом, многофактор- ную регрессионную модель Кокса и кластерный анализ (PCA + K-Means). 

Результаты. Патогенные мутации выявлены в следующих частотах: TP53 – у 7,6% (5/66) пациентов, SF3B1 – у 10,6% (7/66) пациентов. Среди хромосомных аберраций наиболее часто встречалась del(13q) – у 37,9% (25/66) пациентов, del(11q) выявлена у 13,6% (9/66) пациентов, del(17p) – у 7,6% (5/66) пациентов. IGHV-немутированный статус (47 пациентов с нему- тированным и 19 с мутированным) ассоциировался с худшей выживаемо- стью (p = 0,047). Del(13q) не оказывала значимого влияния на OВ (p = 1,000), подтверждая ее благоприятный прогноз. Значимое негативное влияние на ОВ оказывала del(17p) (p = 0,021), тогда как пациенты с del(11q) имели тен- денцию к снижению ОВ (p = 0,054). Мутации TP53 (p = 0,018) и SF3B1 (p = 0,039) также были связаны со снижением OВ. Пациенты с IGHV-мутирован- ным статусом лучше отвечали на терапию FCR (флударабин, циклофосфа- мид, ритуксимаб), в то время как IGHV-немутированные пациенты демон- стрировали лучший ответ на RB (ритуксимаб, бендамустин).